时间分辨荧光

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时间分辨荧光（TRF）检测技术具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合剂作为示踪物，建立的一种新型的非放射性微量分析技术。
自从1983年Pettersson等采用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）法定量测定hCG以来，TRFIA方法学研究和临床应用发展迅速，成为继放射免疫测定（RIA）之后标记免疫分析发展的一个新的里程碑。
TRFIA技术具有灵敏度高、标准曲线范围宽、操作简便、无放射性污染、多标记等优点，可应用于疾病的诊断，食品安全和毒品筛查，已成为生物医学研究和临床超微量生化检验中常用的分析手段之一。
时间分辨荧光即时检验(Point of Care Test，POCT)技术的基本原理是免疫层析检测方法和时间分辨荧光技术的结合，产品是采用的是抗原抗体反应方法，即将其中抗体或抗原固定于载体硝酸纤维素膜上，同时将一定粒径的荧光颗粒标记好的另一个抗体或抗原固定于玻璃纤维上，当样本中含有待检测物质时，标记的抗原或抗体不与硝酸纤维素膜上的抗体反应，在载体硝酸纤维素膜有荧光条带出现，荧光条带的强弱与待测物质的浓度呈线性关系。通过定量检测仪器实现定量检测。本系统具有快速、方便、准确、灵敏等特点。

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目前开发中存在的问题很多。以下列举出来供大家讨论
1、大板切成小条后，存在差异。
2、不同大板之间的小条，检测结果也存在差异。
前两个组成批内差。
3、不同批次之间存在误差。这一误差在很大程度上可以通过定标进行校正。
4、稳定性问题，一般认为免疫层析试剂条在常温下存放也可以，但是目前高温天气增多，所以效期能够到12个月，已经非常困难。另外改进长期稳定性的试验周期会很长，加速测试往往与长期保存的对应关系不一致。
5、最关键的指标是与进口产品的相关性问题，由于抗体上的差异，导致一些样本的结果存在不一致。这时即便怀疑是抗体的问题，也很难选到更合适的抗体，因为都会存在一些问题，所以会保存这些样本，然后再通过缓冲液的优化来改进。
6、检测低限与参考值匹配问题，当POCT产品不能够检测到足够低的，甚至与进口产品的参考值接近时，这时就要考虑，将自己的参考值人为提高一些，尽管会提高假阴性的比例，但是在这一较高的值，误差会降低，换句话说：通过这样的策略会降低假阳性概率，不会将没有病的人说成有病，但是可能将病轻的人说成没病。
7、从研发到生产的转移，虽然说工艺文稿越完善，生产的问题就越少，但是对于POCT而言，个人的素养非常关键，膜贴的是否直，切的条是否一致，发现问题能够及时反馈，等等。所以在转换的最初阶段开始，选人就是最关键的任务。

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对于肌钙蛋白一组数据：
Sensitivity and specificity was optimal for the cobas h232 at 12 hours (97% and 93% respectively), at 6 hours for Radiometer troponin T (97% and 96%), at 8 hoursfor Radiometer troponin I (10% and 90%) and at 4 hours for high sensitive troponin T (100% and 74%).
Sensitivity：true positive rate
specificity：true negative rate
说明：对于相同的marker，不同产品在不同时间得出的结论会不同，原因应该是检测限的问题。所以在进行临床试验参照时，也应该好好选择不同的时间阶段的样本。
对于罗氏的超敏 troponin T，好像与上面我说的第7条有点不同，他宁可检错，也不放过阳性。这样对病人是有利的，仁者见仁者，不知道大家怎么看这个问题。

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与传统发光技术（例如：荧光、磷光）相比，时间分辨发光检测技术具有较高的信噪比，因而具有较高的检测灵敏度。1 标准发光检测方法通过波长差异区分目标发光信号和本底信号，而时间分辨发光技术则通过发光寿命差异区分目标发光信号和本底信号。时间分辨发光技术首先通过短暂的光脉冲激发具有较长发光寿命的发光标记物，等待一段短暂的时间（例如：10 μs），待本底和其他干扰光衰减至很低的水平后，再采集剩余的寿命较长的发光信号。激发、衰减和采集步骤可循环、累加，从而进一步改善信噪比。这样，在测定标志物中寿命较长的发光信号前，即可将寿命较短的信号（包括样品混合物中的散射光和自身荧光）剔除。消除本底信号对于在利用横流试纸进行发光测定而言非常重要，因为试纸的膜性结构会对激发光产生强烈的散射。另外，横流测定中常用的硝酸纤维素膜本身就会产生荧光，也需要消除。总的说来，对于液体样品，时间分辨发光法的检测灵敏度比传统发光检测方法高2到3个数量级。

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时间分辨荧光的原理和技术已经证明完全可以适用于诊断行业，而且很多公司已经形成了产品。但是各个公司的产品存在很大的差别，真正的体现出公司的管理水平的技术实力。下面列举一些POCT的公司：

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广州万孚生物技术有限公司自1992年成立以来，致力于从事医学检验诊断产品的研发、生产和经营，是一个集开发、生产、经营为一体的专业生产体外诊断试剂的实体性高新技术企业。

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上海奥普生物医药有限公司是一家专注POCT（轻松检验、快乐体验）的试剂仪器研发、生产、转化与销售的国家高新技术企业。近期已正式引入全球最大的专注于生物医疗领域的投资公司——奥博资本，现已正式转型为混合所有制经济实体。 奥普生物成立于1997年，目前拥有员工近260人，是上海市中小企业“著名品牌”。

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艾康生物技术（杭州）有限公司是旅美留学博士创办的外商独资生物技术公司，公司成立于1995年，是国内首家通过中国GMP、欧洲CE、ISO13485三大国际权威认证和美国FDA注册的生物诊断公司，是国家火炬计划重点高新技术企业，浙江省技术创新优秀企业，杭州市重点工业企业，连续三年入选“福布斯中国潜力100榜”。生产管理严格按照国际质量管理体系运行，保证了产品的高质量，被业界誉为“全球快速诊断专家”。

艾康依托中美两地人才技术优势，在生物诊断领域已形成完善的研发、生产和销售的产业化体系，为公司的可持续发展提供了强大的动力。

公司具有健全的技术平台，包括基因平台、抗体平台、化学平台、免疫平台、分子平台、电化学平台、光化学平台和医疗器械平台。公司现有产品，包括生物诊断系列产品、生物传感器、生物芯片等，均为自行开发、自主创新。

目前公司已成功开发了PCR检测试剂、酶联免疫检测试剂、血糖仪、尿液分析仪、干式生化分析仪、血红蛋白分析仪、血脂分析仪、核酸提取仪等医疗器械及相应检测试剂等100多种快速诊断产品。平板和全自动式化学发光检测仪、核酸分析仪、血球分析仪等大型医疗器械及相应检测试剂已投入研发，在不久的将来会陆续上市。公司获得了73项美国FDA文号、4项中国SFDA新药证书、80项中国SFDA医疗器械证书，80个产品获得欧洲CE认证，产品畅销世界140多个国家和地区，成为全球最大的生物诊断产品产业化基地之一。