解决发酵染菌的真实案例（跟帖补充查找染菌完整过程者1

008chf

我先来抛砖引玉
发酵大生产染菌1
1现象：
一级种子罐连续染菌，菌型一致，均为芽孢杆菌，接种后24小时就当班片子种发现，量相当大。5批染3－4批。罐内无搅拌，夹套降温，罐内无结垢，可以说无死角。
2分析：母瓶无菌斜面正常，不接种的白料无菌试验罐也染菌（种子原因排除），消后无菌斜面正常，接种后12小时左右的斜面能镜检出杂菌（操作原因基本排除）。罐体内只有一取样管和一空气管，较干净，蒸汽压力和仪表温度对应良好，消毒工都有十几年的工作经验，操作问题不大（为了排除操作问题，我和技术员和消毒工共同消了几个罐，无菌仍不正常）。判断有罐体内可能有料垢和死角。
2采取措施：
利用甲醛熏消，对罐体和阀门管道进行试漏，对过滤器进行更换消毒，没有发现太大问题，熏消后无菌正常一两批，随后仍然染菌，我们随后开始检修所有靠罐阀，也无问题。直至有一次，对此罐进行无菌试验，消毒时发现其物料靠罐阀盘根处消毒时有渗水现象（正常运转时也有，量小，相当难发现),随即更换此阀门，无菌立刻好转。
3结论：
根据我在生产中碰到和解决的无菌问题来看，靠罐阀的检修不到位造成的染菌站15％左右，包括密封垫脱落、老化，阀头脱落，外漏，内漏等等，作大生产，要不有钱买好设备，要没钱必须要有好的制度和好的操作工。根据我的生产经验看，买好设备要划算的多，染一罐少则损失几百元，多则几十万。

李木子

补充:我们这儿蛇管漏就发生了好几次.有一次,好几个大罐都染菌,菌型\\染菌周期都一样.70小时左右,杆菌.试了好长时间,够20天,才试出该种子罐蛇管漏.有时候根本反映不出来.

zhaolili1820

写的好!收益非浅!

008chf

抗生素发酵大生产染菌2
1现象：
将近半年时间，菌种间歇染芽孢杆菌，在供种之前镜检时发现无菌不正常，有时镜检也不能发现，给生产造成极大影响。
怀疑几点:1培养基未消透2接种工具未消透3接种操作存在4操作间管理不善,洁净情况不好
灭菌压力和温度正常,校对数次,无问题.121度20分钟.
工具包装正常,工具灭菌时间更长
每个员工都存在染菌,请经验丰富的老师傅看也没看出操作问题
操作间尘降菌符合要求(平皿培养基无问题)
2采取措施：
更换超净工作台过滤，用多种消毒液对操作间进行消毒，对使用工具进行长时间灭菌消毒，对蒸汽灭菌柜作灭菌验证。
作各种试验，确定起染时间，最终确定培养基没有消透。
3结论：
原来的培养基消毒工艺为保证培养基消后质量，保温保压时间较短，而其中一种原料种更换批号后，可能含菌量和菌型有所变化，造成灭菌不彻底。

008chf

再来一个：
1现象：几乎所有运转罐全部染菌，培养基中镜检有菌，无菌斜面和肉汤中镜检有菌，几乎为同一时间，菌量增加很快。未补料的罐无菌正常。
2分析：镜检了所有的运转罐，发现未补料的罐无菌正常，很明显，这是由于补料染菌造成的，立刻停止所有罐的补料。开始查各种补料的消毒记录，查找开始补各种料的准确时间，一查，只有一种料对应；将此料消毒罐的料压出一看，夹套穿孔了。立刻焊好，试漏，此后，无菌开始正常。
3结论，要做好各种补料罐的消毒和补料开始时间记录，对分析哪种料染菌很有用。当然，无菌斜面也对判断起染时间很重要。如果是重要的料，最好能取无菌样对无菌进行监控。
希望有大生产经验的积极进行交流，相信大家都有很多经验的。

gxj604

写的好!收益非浅!

008chf

1现象：
一段时间，某二级种子罐接种时无菌镜检正常，接入发酵罐，在发酵罐pH降低至最低点之间时大量出现芽孢杆菌，1000倍显微镜一个视野内少则有数十多则就有数百上千（很恐怖），发酵罐泡沫较平常大很多，但只要能将搅拌开启（因染菌，泡沫较大，开搅拌泡沫更多，但必须开，逃液也得开，不开pH不回升，罐就彻底完了）pH回升，则芽孢杆菌16小时内即可消失，效价损失不大，在10％以内，有时效价很正常。
2采取措施：
首先是对改罐进行除垢，利用碱水煮罐，甲醛熏消，靠罐阀检修，过滤器更换消毒，罐内盘管查漏。结果竟然是我们首先认为最应该没问题的内盘管出了漏点（因为，我们公司盘管漏绝大多数染细短杆），后来我们分析，此罐为10吨罐（我们有特殊用途，一般消4.5吨），而这次漏点在内盘管最高处，漏点很小，8公斤压力，半小时才漏了一滴，漏的水下来较慢，镜检较困难。
3结论：抗生素发酵中，有多次遇到这种现象，染特定菌不影响效价，甚至有助于效价的提高，特别是芽孢杆，有相关经历的站友可以进行下交流。

1罐内夹套穿孔检查办法：
罐内夹层易穿孔的地方,大部分在焊缝和底封头的凹进部分.在焊接过程中操作质量差以及在使用过程中遇热突冷常造成焊接点损坏.底封头凹进部分穿孔则是因为夹套内冷水侵蚀,使凹面受损造成的.
检查方法是罐内放尽积水,开空气吹干或用布擦干罐内壁.
将夹套内充满水，用打压器将夹套内打水压0.6MPa以上,重点检查以上部位，是否有水不断渗出，有时，穿孔较小时，半小时渗一个小水珠，要注意观察。特别是关内壁要擦干.夹套的直筒部位,很少会发生穿孔.
也可将夹套内的水防尽，用耐压橡皮管将压缩空气同入夹套内，用肥皂水喷或涂抹以上部位，看是否有气泡不停冒出，有些小漏点，气泡很小，要注意观察。
2罐内蛇形管易穿孔的部位大部分在焊缝和蛇形管的弯头处及蛇管卡子附近，直管穿孔的可能性不大。弯头在管件加工时，金属本身晶格结构受损。使用时弯头处受力最大，再加上遇热突冷，所以容易穿孔。蛇管卡子处穿孔是因为松动磨损造成的。
检查方法和夹套相似。
不知大家有没有别的方法。

yuanjianf

有一问题请教:为什么染芽孢杆菌,在代谢正常的情况下对效价没有影响?有时还有助于效价的提高呢??这似乎不太符合逻辑啊

008chf

我们认为有以下几种情况
1降低发酵产量，杂菌与生产菌争夺培养基营养成分，导致生产菌营养不足；杂菌的代谢产物改变发酵液的pH，影响生产菌的代谢和生长，杂菌所产生的酶和一些物质可能抑制甚至破坏发酵产物。
2从以上情况看，只与生产菌争夺培养基营养成分。其它方面都不受影响。
3杂菌所产生的酶等代谢产物正好是生产菌所需要的，可提高发酵产量。
但可能造成较大的杂质，影响提炼收率。
一家之言，欢迎大家讨论。

yuanjianf

第一种情况，也就是现在发酵行业所忌讳，头痛的染菌原因，大体都是杂菌的代谢对目标产物的抑制或者是对菌体生长造成不利的生长环境，在发酵初期，染杂菌的后果尤为严重。
第二种情况，希望是出现共生环境；
至于第三种情况，杂菌能起到正向调节作用好象没有过报道。最多也就 是在第二情况下，限制菌体发酵后期的强烈生长，促使微生物的次级代谢方向，可能在抗生素的发酵过程存在的多一点。

hq0250

请问楼主：关于2楼你所提到的灭菌柜的灭菌验证的方法是什么啊？能否告知我呢？谢谢！