有点疑问，冷冻保存究竟应该速冻，缓冻？复苏的时候升温

nihaowoyehao

有一点儿一直纳闷儿，因为从书上看到的不一致，不同实验室的做法也正好相反。
就是在冷冻保存菌种的时候，究竟应该是快速冷冻还是逐渐降温（比如是直接在液氮中冷冻还是先－20度，然后－70度），复苏的时候应该逐步缓慢升温，还是快速升温？
虽然知道目的都是减少冰晶的形成，但由于不同的书籍上不一样，不同实验室做法也不一样，而且没有权威的说法，哪位能够给出权威的说法？

细履平沙

没有具体操作过，我们只冷却到-20度左右，而且用量很大，短期内就制备新的冷冻管，使用时在室温下自然解冻。没有试过其它的操作。
降温曲线和升温曲线对菌体的存活情况影响很大，不同的温度过程就会有一个结果，这一点与药品冷冻干燥时通过控制降温曲线来控制晶形，进而控制药品质量很相似。
但是，我感觉逐渐降温应该好一些，先在一定的温度下使孢子休眠，然后再深冷，有一个适应的过程，这样会死亡率会低一些。
其它人有什么想法呢？

guo

同意总斑竹的想法！

细履平沙

今天我和一个同学讨论这个问题,他说了他们的作法:
冷却时先降温到-20度,然后直接进行深冷.在解冻时快速解冻,直接放置在37度水浴中.

nihaowoyehao

最好大家能够找到原始的文献，因为不论那种做法都认为自己的做法是正确的，目的都是减少冰晶的形成。
我试图找过，但没有结果。
希望大家努力解决！

yinlijing

不用缓慢降温,直接降至最低温度就可以,对菌种没有损坏,我们就是这样做的.

sea

我们的做法和5楼的一样，直接降温和缓慢降温对菌种的生产能力影响不大

friend520

个人认为：降温可能要缓慢，解冻直接放37度水浴

wzidiotzy

影响非玻璃化冻存效果的因素主要是冻存温度、冷冻速度、融冻速度及冷冻保护剂.
其目的一是减少冰晶的形成，二是减少溶质损伤．

    不同的菌种对低温的耐受性不同，因而应采取不同的降温速度，但一般来说，缓慢冷冻比快速冷冻对细胞结构影响小，复苏率高，当然，降温速度也不能太慢，否则细胞会因为失水过多而死亡，大量冻存实验表明,融冻速度越快，细胞存活率越高，而且融冻时细胞受损，主要还是由于渗透压的关系．

   不知搂主使用的是什么冷冻保护剂，若使用非渗透性冷冻保护剂，则不同的非渗透性冷冻保护剂在快速冷冻和缓慢冷冻的过程中，所起的保护作用有较大区别．

mission

至于降溫, 不同菌种, 可以不同处理.
对于工业用菌种,
(1) 做实验 (最好用response surface design)
(2) 你自己要记录下历史数据, 用统计数据来说明问题.

比如说我们的菌种保存(no anti-freeze reagent) 在液氮中, 我们发现分两步冷冻效果最好(产量重复性). 用计算机记下温度曲线.