y190227240 发表于 2016-12-29 15:00:28

染菌问题

我们是基因工程菌，一代，二代，转小罐，最后转大罐培养，最近几个批次查出来大罐最终收获的菌体染菌，小罐之前的都没有问题，但是我们大罐的生产和以前状况没有任何差别，我们在大罐的培养过程中不涉及补料，只需调节酸碱，但也是自动调节的，进气和排汽的呼吸器都没有动过，最终镜检也是合格的，但是在送样的培养中确实出现染菌，我们的菌体也可以正常收获，请问这种染菌的情况到底能不能存在，在不影响主菌体的情况下染菌？谢谢

细履平沙 发表于 2016-12-29 15:56:48

记得前面你的贴子中提到你们种子培养过程有选择压力，是不是失效了，也就是说之前也有小量染菌只是没有发现。个别罐染，还是几个罐染？

y190227240 发表于 2017-1-3 14:28:49

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细履平沙:记得前面你的贴子中提到你们种子培养过程有选择压力，是不是失效了，也就是说之前也有小量染菌只是没有发现。个别罐染，还是几个罐染？ (2016-12-29 15:56) images/back.gif

应该是连续的几批吧，前几批没有发现，我们是收集菌体高压破碎成包涵体，在后续工作中发现的。就一个大罐，参数压力什么的没什么变化，整批的调节酸碱的用量也差不多，就是感觉泡沫不太多。

细履平沙 发表于 2017-1-4 09:44:26

1、单个罐，应该不是种子问题。概率太低
2、接种过程，应该也不是。
3、空气系统，可能性较小，因为你们是放罐后才发现。
4、补料不知道有没有问题。
5、可能与设备相关，比如罐没有处理好，有结块。最好下罐好好查查。轴封漏，当罐压有波动的时候，可能产生瞬间相对负压。

vei_20004 发表于 2017-1-13 21:27:14

1、同一个种子罐，移种不同大罐只有一个大罐染菌，初步判断大罐问题
2、移种该罐的管道上阀门
3、该大罐本体问题
4、染菌的菌型
5、泡沫少，菌体是否受到抑制，还有就是基因工程菌在该罐内是否存在影响质粒脱离的情况，导致野生菌生长呢？
6、其可能实染菌早就有了，只是在最后才爆发出现，不容易发现
解决
1、该罐彻底检查管内是否存在死角，用5%氢氧化钠100煮沸维持4小时
2、更换所有靠罐一阀垫片
3、大罐做无视培养
4、上罐后做无菌样灭菌后、调酸后、移种后每6小时取无菌样观察
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