细履平沙 发表于 2020-10-1 09:04:32

DNA shuffling

DNA shuffling是一种基于PCR技术的、新的体外定向分子进化技术。它利用DNase将欲改造的基因或基因家族打断成一定的大小的片段,在PCR变性后的复性过程中,利用片段间具有的部分同源性发生错配。错配的片段互为模板进行延伸。而与此同时,不同来源的基因间也可发生重组,形成融合基因。经过反复的变性、复性(错配)和延伸(重组),直至扩出全长基因。这些基因在延伸中因为错配引入了突变,通过重组使基因融合,从而创造了新的基因。再通过人类的定向选择,最终可以得到一些符合人类需要的新基因。DNA 改组 (DNA shuffling) 也被广泛用于体外突变文库的产生。比如有人开发了一种简单且可重复的方法,他们利用核酸内切酶V 产生DNA 片段,成功实现了DNA 改组,使漆酶CotA 在大肠杆菌中的异源表达活性提高了1.21 倍。
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