冰雪凌露 发表于 2011-4-27 20:40:48

DNS法测葡萄糖怪异现象还望专家解析挺急的谢谢

培养基为LB+5g/L葡萄糖，装有100ml培养基的250ml摇瓶，大肠杆菌表达胞内蛋白，3h后诱导，7h后收菌。每隔1个小时测葡萄糖含量（DNS法）：

                    h    10*OD   20*OD   30*OD21.7031.4940.45831.5541.2460.42141.3051.3040.30951.2340.9550.2861.0770.8340.20871.040.753        h     24.751374.168263.8334634.335666.952683.5237743.640957.276322.5863353.442865.32892.343663.004834.653721.7409672.90164.201740

数据说明：
第一竖排2，3，4，5，6，7表示时间
10*OD表示发酵液稀释10倍后测OD540，
20*OD表示发酵液稀释20倍后测OD540，
30*OD表示发酵液稀释30倍后测OD540.

第二竖排2，3，4，5，6，7也表示时间
数据对应于上面OD值经标准曲线计算的葡萄糖含量并乘以相应的稀释度求得到葡萄糖含量(mg/ml)。
标准曲线方程为y=0.279x    x代表OD，y代表葡萄糖含量。R方=0.9925

问题：为什么经过不同稀释度会有这么大的差距，我该如何选取？
望高手给予解答谢谢。

另外，我标准曲线数据（其中OD大于1的是经显色后稀释测定的数据）不经稀释的标准曲线数据：
   OD   mg0.810.21.3620.42.1390.62.9920.83.491

lixianjian 发表于 2011-4-28 12:56:55

转化为葡萄糖时，稀释二十倍的计算有问题，请查证一下
对于稀释倍数，应当是是减去对照之后的OD在0.5左右，其超出0.8均得不到有效的数据，从你给你的数据来看，你应该稀释在15倍左右可以得到比较好的数据。
如果要求精准可以以液相的数据可一个对照，筛选一个比较好的稀释倍数，以后坚持用。
个人愚见，欢迎讨论。

bio_tec 发表于 2011-4-28 16:36:59

1.分光光度计读数超过0.8时不作为有效检测数据。
2.“我标准曲线数据（其中OD大于1的是经显色后稀释测定的数据）”不好理解？不管是做标曲还是测定样品，应该事先判断稀释倍数再反应显色后测OD，而不是等显色后发现OD值超标再直接稀释反应后的显色液。

冰雪凌露 发表于 2011-4-28 21:37:20

非常感谢两位的指点，我想我知道问题在哪儿了，主要是比色法的一些基本内容没有详细探究，再次感谢两位。谢谢
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