关于压力筛选

blueicedu

准备使用链霉素作压力筛选，有个具体问题想请教各位，就是链霉素怎么加到平板里的。文献上说使用在链霉素浓度为1000ug/ml的筛选平板上做。是用配好1000ug/ml的链霉素溶液先涂布到制备好的平板上，再涂布菌液，还是在倒平板之前加进去？如果是第一种方法，似乎不能保证链霉素的浓度和均匀性。而第二种方法的话好像也不太可能，因为这样要使用的链霉素量是很大的，如果要作浓度梯度确定最小剂量的话也很不方便。

zhangyq77

在培养基倒平板之前加入。加入前培养基温度不能太高，否则对链霉素有影响。
小浓度梯度，可以先对链霉素溶液进行稀释，然后计算加入量。
就是1000ug/ml所用链霉素也不是很大，再说，链霉素粉针也不是很贵。

三可

赞同楼上的。
如果不需要知道具体浓度，可采用梯度平板法。
将平皿斜放，到10mL的普通培养基。待凝固后再将平皿平放，倒入较高浓度的选择培养基。
将抗生素涂布到制备好的平板上是不可行的。

细履平沙

我们做过将抗生素加到菌悬液中，然后混匀，涂布到平板上。这样效果也不错。

blueicedu

谢谢大家，我想再请问一下，平常做平板的时候都会先空白培养两三天，一方面确定无菌，另一方面可以挥发掉点水汽。而加了抗生素的平板需不需要进行空白培养呢？
还有，链霉素溶液应该不用灭菌，直接用水溶解就可以了吧？

halfz

要是你的菌株对空气湿度敏感可以先空培养几天。另外链霉素溶液不能湿热灭菌，但是溶解后需要用无菌过滤器过滤后使用。

blueicedu

原先想想很简单，经过大家这么一说才发现还有不少问题。1、链霉素来源。我们是买了链霉素的标准品准备来做的，但是标准品量比较少，一支也就200mg，所以我前面会担心不够用。原来还可以用粉针阿，是不是会便宜很多，到哪里买呢？2、过滤链霉素的无菌过滤器是什么样的？以前在学校实验室作HPLC进样前会先用套在针筒上的小的过滤器过滤发酵液，这种可以吗？

细履平沙

可以先将过滤头灭菌，然后使用前过滤便可，有些人链霉素不过滤直接使用。

halfz

6楼的，链霉素其实作为一般培养基使用没必要用纯度那么高的，（除非你做基因工程另外说啊）。你可以去社区卫生服务站那里买链霉素粉剂的，一般他们一个瓶子是100万单位的。由于有时候他们不给说是处方药，我现在图省事都是去兽医站买兽用的，方便而且比人用的便宜很多啊。嘿嘿

zhangyq77

买的粉针安瓿瓶里的链霉素本身就是无菌的，你灭点蒸馏水不就行了？用无菌水在超净台上溶解了，然后用灭菌的吸管加到培养基里就OK了。干嘛要用过滤？
链霉素不贵，价钱好像也就1块钱1只。但是现在链霉素人们用的少，所以很多诊所没有。去传染病医院看看，这玩意是治疗“痨病”的嘛。