求助：重组蛋白的纯化工艺

xff9178 · 发表于 2007-9-5 18:24:11

有没有做重组蛋白发酵的前辈啊，如何大规模分离纯化呢

clycly · 发表于 2007-9-6 10:19:58

我想问一下你说的大规模指的是什么?具体是哪一方面的

huanghua · 发表于 2007-9-6 11:54:31

纯化用到的方法如：破碎、沉淀、层析等，但是要大规模的话，对仪器要求比较高，比如破碎就要用高压破碎，用超声破碎就让你很头疼了，一般离子交换、疏水、亲和层析用到较多，但是步骤要尽可能少，宁可花一些时间优化纯化条件，这样得率高些。高压破碎仪推荐用constant system 高压细胞破碎仪，一次破碎率达到99%，且重组蛋白活性不受影响。

xff9178 · 发表于 2007-9-7 21:42:53

就是大点的，几百升的发酵罐，然后分离纯化目的蛋白，这个蛋白分子量很小4KD 左右，也没查到特异的亲和物质，所以不知道怎么纯化呢，求各位前辈帮帮忙啊，谢谢啦

huanghua · 发表于 2007-9-8 11:51:34

如果是胞内表达,就破碎细胞(高压破碎),离心或过滤(当然的得适合大体积操作),上清液进行离子交换层析(根据其等电点选择阴离子或阳离子层析介质,)洗脱后进行反相层析(因分子量较小,根据极性大小可选择反相,但是要注意吸附和洗脱溶剂选择,不能使蛋白变性),也可凝胶过滤，一般用在最后纯化阶段，可能处理量比较小。最好找文献看一下有没有可能进行亲和层析，这样特异性较好。
如果是包涵体表达的话，就令当别论了