大肠杆菌BL21发酵初期自溶
小弟目前在大肠杆菌发规模发酵上遇到了很大的问题:我们目前采取的是三级发酵,发现三级发酵罐移种后头1~2小时菌种生长正常,但OD600到了2左右就开始溶氧上升,OD下降到灭菌后水平,PH上升,通过镜检发现菌种已经自溶,大约再过8-10小时又能长上来,蛋白也能够正常表达。有时候又能够长得很好,不出现这个问题。
最初在是在三级发酵罐出现这种现象,但最近在一二级种子罐内也开始发生菌体自溶现象,出现问题的发酵液都做过噬菌体平板,没有发现噬菌斑存在。
这个问题困扰了很久了,大家帮我想想办法,小弟在此谢过了。 经历过染噬菌体出现这种现像的情况。楼主没有染噬菌体。那我给的建议:
关键阶段取培养液接到一些摇瓶中,然后观察摇瓶的情况,确定原因。看看什么时候出现的情况。
如果摇瓶不自溶,那么也可以判断是工艺或设备的情况。 问题严重了,建议再查查噬菌体!
内容来自[手机版] 实消前后都取过摇瓶样,实消前的摇瓶样用灭菌锅灭菌,接种后能够正常生长,反倒是实消后的摇瓶样不稳定,有时候发酵罐自溶摇瓶样反而能够生长,有时候一起自溶。
先怀疑是空气系统带入杂菌,但摇瓶样长时间空白培养后,镜检没有发现杂菌。
后又改变的灭菌工艺,降低灭菌时间和温度,问题依旧。看来又要重新找噬菌体了 问题解决,昨天检测到了噬菌体,现在全厂灭菌中 一看就是典型的噬菌体症状!被噬菌体困扰了很长时间
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