大肠杆菌BL21发酵初期自溶

sexy758 · 发表于 2013-10-3 17:16:01

小弟目前在大肠杆菌发规模发酵上遇到了很大的问题：

我们目前采取的是三级发酵，发现三级发酵罐移种后头1～2小时菌种生长正常，但OD600到了2左右就开始溶氧上升，OD下降到灭菌后水平，PH上升，通过镜检发现菌种已经自溶，大约再过8-10小时又能长上来，蛋白也能够正常表达。有时候又能够长得很好，不出现这个问题。

最初在是在三级发酵罐出现这种现象，但最近在一二级种子罐内也开始发生菌体自溶现象，出现问题的发酵液都做过噬菌体平板，没有发现噬菌斑存在。

这个问题困扰了很久了，大家帮我想想办法，小弟在此谢过了。

细履平沙 · 发表于 2013-10-4 07:13:55

经历过染噬菌体出现这种现像的情况。楼主没有染噬菌体。那我给的建议：
关键阶段取培养液接到一些摇瓶中，然后观察摇瓶的情况，确定原因。看看什么时候出现的情况。
如果摇瓶不自溶，那么也可以判断是工艺或设备的情况。

fermenter · 发表于 2013-10-4 07:39:13

问题严重了，建议再查查噬菌体！

内容来自[手机版]

sexy758 · 发表于 2013-10-4 12:57:32

实消前后都取过摇瓶样，实消前的摇瓶样用灭菌锅灭菌，接种后能够正常生长，反倒是实消后的摇瓶样不稳定，有时候发酵罐自溶摇瓶样反而能够生长，有时候一起自溶。

先怀疑是空气系统带入杂菌，但摇瓶样长时间空白培养后，镜检没有发现杂菌。

后又改变的灭菌工艺，降低灭菌时间和温度，问题依旧。看来又要重新找噬菌体了

sexy758 · 发表于 2013-10-8 16:22:43

问题解决，昨天检测到了噬菌体，现在全厂灭菌中

wenshui · 发表于 2022-4-14 13:44:02

一看就是典型的噬菌体症状！被噬菌体困扰了很长时间

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