【转载】微生物限度检查法方法验证
微生物限度检查法方法验证检品名称：***胶囊
批号： 060210 规格：0.3g/粒
生产单位：无锡市*********
验证依据：中国药典2005年版一部附录XⅢ C
1 验证目的：
建立***胶囊的微生物限度检查方法，确认该方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌测定及控制菌的检查
2 验证用菌株：
名称 编号 来源 编号
金黄色葡萄球菌 中国药品生物制品检定所 金-3-20060310-2
大肠埃希菌 中国药品生物制品检定所 大-4-20060310-1
枯草芽孢杆菌 中国药品生物制品检定所 枯-2-20060301-3
白色念珠菌 江苏省药品检验所 白-5-20060301-2
黑曲霉菌 江苏省药品检验所 黑-5-20060216-1
2.1 菌液制备：
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基中，35℃培养24h，分别用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每ml含50~100个cfu的菌液。
将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，24℃培养72h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每ml含50~100个cfu的菌液。
将黑曲霉菌的孢子接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，24℃培养5天，使大量孢子产生。再加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液用无菌玻棒轻轻将孢子洗脱，然后用一支管口 包有无菌棉花且能过滤菌丝的10ml吸管吸出孢子液至无菌试管内，用标准比浊管比浊后，稀释为每ml含50~100个cfu的菌液。
3 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证
验证试验至少应进行三次独立的平行实验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。
3.1 试验组
平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50~100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过滤法计数时，取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50~100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。
3.2 菌液组
测定所加入的试验菌菌数。
3.3 供试品对照组
取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。
3.4 稀释剂对照组
若供试品制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。试验时，可用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液含50~100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。
3.5 菌回收率计算
试验组的菌回收率（%）= 试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数 *100%
菌液组平均菌落数
稀释剂对照组的菌回收率（%）= 稀释剂对照组平均菌落数 *100%
菌液组平均菌落数
3.6 结果判断
在3次独立的平行试验中，若稀释剂对照组的菌回收率和试验组的菌回收率均不低于70%，照该供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。
3.7 结果（见续页）
4 控制菌检查方法验证：
4.1 试验组
取规定量供试液及10~100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。
4.2 阴性菌对照组
方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌；验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。
4.3 结果判断
阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。若试验组检出试验菌，按此供试液制备方法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查。若试验组未检出试验菌，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。
4.4 验证结果：（见续页）
5 结论：
本品按中国药典2005年版一部附录XⅢ C微生物限度检查法进行方法验证，结果
霉菌及酵母菌可采用常规法制备供试液进行检查；细菌采用低速离心（500rpm/min* 5分钟）联合培养基稀释法（0.2ml）进行检查；可采用常规法制备供试液对大肠埃希菌及大肠菌群进行检查。 顶了 下了，有用。
谢了，顶了:) test 终于足一小时了，不容易啊。
不错，非常实用。 要知道简单的一句鼓励或感谢的话，对楼主们是很重要的。 实用的东西,顶了
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