【转载】微生物限度检查法方法验证

sunlangwolf

微生物限度检查法方法验证


检品名称：***胶囊
批号：    060210         规格：0.3g/粒
生产单位：无锡市*********
验证依据：中国药典2005年版一部附录XⅢ C

1       验证目的：
建立***胶囊的微生物限度检查方法，确认该方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌测定及控制菌的检查

2     验证用菌株：
名称    编号    来源    编号
金黄色葡萄球菌    [CMCC(B)26003]    中国药品生物制品检定所    金-3-20060310-2
大肠埃希菌    [CMCC(B)44102]    中国药品生物制品检定所    大-4-20060310-1
枯草芽孢杆菌    [CMCC(B)63501]    中国药品生物制品检定所    枯-2-20060301-3
白色念珠菌    [CMCC(F)98001]    江苏省药品检验所    白-5-20060301-2
黑曲霉菌    [CMCC(F)98003]    江苏省药品检验所    黑-5-20060216-1
2.1   菌液制备：
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基中，35℃培养24h，分别用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每ml含50~100个cfu的菌液。
将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，24℃培养72h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每ml含50~100个cfu的菌液。
将黑曲霉菌的孢子接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，24℃培养5天，使大量孢子产生。再加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液用无菌玻棒轻轻将孢子洗脱，然后用一支管口 包有无菌棉花且能过滤菌丝的10ml吸管吸出孢子液至无菌试管内，用标准比浊管比浊后，稀释为每ml含50~100个cfu的菌液。

3     细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证
      验证试验至少应进行三次独立的平行实验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。
3.1   试验组   
平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50~100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过滤法计数时，取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50~100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。
3.2   菌液组  
测定所加入的试验菌菌数。
3.3   供试品对照组
取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。
3.4   稀释剂对照组
      若供试品制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。试验时，可用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液含50~100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。
3.5   菌回收率计算

试验组的菌回收率（%）=    试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数    *100%
    菌液组平均菌落数   
稀释剂对照组的菌回收率（%）=    稀释剂对照组平均菌落数    *100%
    菌液组平均菌落数   
3.6       结果判断
在3次独立的平行试验中，若稀释剂对照组的菌回收率和试验组的菌回收率均不低于70%，照该供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。
3.7   结果（见续页）

4     控制菌检查方法验证：
4.1   试验组
取规定量供试液及10~100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。
4.2   阴性菌对照组
方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌；验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。
4.3   结果判断
阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。若试验组检出试验菌，按此供试液制备方法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查。若试验组未检出试验菌，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。
4.4   验证结果：（见续页）

5     结论：
本品按中国药典2005年版一部附录XⅢ C微生物限度检查法进行方法验证，结果
霉菌及酵母菌可采用常规法制备供试液进行检查；细菌采用低速离心（500rpm/min* 5分钟）联合培养基稀释法（0.2ml）进行检查；可采用常规法制备供试液对大肠埃希菌及大肠菌群进行检查。

云中漫步

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fycwolf

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test

洽洽

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酒精灯

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panxuehua

实用的东西,顶了