求助：有没有做氨基酸结晶的同仁啊，帮帮忙吧

xff9178

         我们实验室做缬氨酸中试，发酵液经超滤、陶瓷膜过滤后浓缩结晶，实验室使用旋转蒸发器进行。
    因为标准品要求结晶产品PH值在5。5－－6。5之间，我们的一直不达标，因此重新溶解后调ph，结果用NaOH调ph的过程中发现了很怪异的现象，当ph调到5.0以后出现白色絮状沉淀，而另一批母液ph调到6.2－－6.3时出现白色絮状沉淀，缬氨酸的等电点是5.97，按照常理来说不该在这几个ph段出现白色沉淀的，不知道这是什么原因？白色絮状的东西又没办法检测，不溶于水，当加酸调ph4左右时，溶液变澄清。这几天头都大了，实在弄不明白是什么原因，求各位大侠赐教，小妹在此谢过了。
顺祝大家中秋快乐！

mljever

是不是发酵过程中产生了别的副产物氨基酸啊，调pH后会出现沉淀？你们分析发酵液的成分了么？
另外，请教一下你们的发酵液经过超滤、陶瓷膜过滤后也可以去除盐离子是吗？发酵液选装蒸发完后就出现缬氨酸结晶啦？我最近在1，3－二羟基丙酮发酵液中的提取，但是怎么蒸最后得到的也是膏状物，不知道什么原因

ljyhf

陶瓷膜属于微滤范围，最好的截流是30纳米，工业应用上50纳米，超滤的截流比微滤还小些，对截流蛋白可行，除盐肯定不行。

xff9178

引用第1楼mljever于2008-09-11 23:36发表的  :
是不是发酵过程中产生了别的副产物氨基酸啊，调pH后会出现沉淀？你们分析发酵液的成分了么？
另外，请教一下你们的发酵液经过超滤、陶瓷膜过滤后也可以去除盐离子是吗？发酵液选装蒸发完后就出现缬氨酸结晶啦？我最近在1，3－二羟基丙酮发酵液中的提取，但是怎么蒸最后得到的也是膏状物，不知道什么原因

超滤、陶瓷膜过滤不能除盐，只能除一些菌体及颗粒较大的蛋白等。原来发酵液的蛋白含量在8～9％，过滤后的在3％左右。
发酵液也产生了别的氨基酸，主要有丙氨酸、异亮氨酸，但是跟缬氨酸等电点差不多，所以比较难分离，我们只是采取初步粗结晶的方法。旋转蒸发可以出现缬氨酸结晶的，晶体粉末状，但是母液再调ph或者重溶晶体之后再调的话会出现很多白色絮状的东西，过滤之后就是膏状物，可能mljever的膏状物跟我们试验中的白色絮状物或许是一个东西，真不知道那是什么啊，试验也没办法进行。。。

mljever

哦，我们就一直没有出过结晶，旋转蒸发最后就是得到的膏状物

厦门吹雪

我怀疑白色絮状物是钙盐沉淀，肯定不溶于水，溶于盐酸。你如果用稀硫酸等量滴定看看，是不是还不溶解，这样就能确定是不是钙盐了。

xff9178

引用第5楼厦门吹雪于2008-09-16 00:54发表的  :
我怀疑白色絮状物是钙盐沉淀，肯定不溶于水，溶于盐酸。你如果用稀硫酸等量滴定看看，是不是还不溶解，这样就能确定是不是钙盐了。

谢谢啦，我们明天试试。可是发酵液中用的钙很少啊，应该不会有那么多沉淀吧，明天按照你说的方法试试。。。

lancy-8

我怀疑是某种代谢副产物，在pH5.0以上时会析出来，母液pH6.2～6.3析出来的是另一种代谢产物。建议在pH5.0～5.5时将析的物质过滤掉，然后清液再浓缩、结晶，拿到产品，分析产品的质量和收率；同理去掉母液pH6.2～6.3的物质。如果两种情况下都对收率没明显影响，而产品质量有所提高的话，可以在不同的pH时去掉杂质，纯化产品。

不知道这样行不行，只有实验才能知道。希望有所帮助。

lancy-8

mljever 一直没有出过结晶，得到的都是膏状物质，是因为杂质较多，增大了产品的溶解度，且杂质的存在影响晶体的析出。

应该在结晶前尽量的去掉各类杂质，料液越纯，产品越容易结晶出来，且质量越好。办法需要根据物料的性质和产品的特性而定。

xff9178

引用第7楼lancy-8于2008-09-17 01:58发表的  :
我怀疑是某种代谢副产物，在pH5.0以上时会析出来，母液pH6.2～6.3析出来的是另一种代谢产物。建议在pH5.0～5.5时将析的物质过滤掉，然后清液再浓缩、结晶，拿到产品，分析产品的质量和收率；同理去掉母液pH6.2～6.3的物质。如果两种情况下都对收率没明显影响，而产品质量有所提高的话，可以在不同的pH时去掉杂质，纯化产品。

不知道这样行不行，只有实验才能知道。希望有所帮助。

谢谢lancy-8的建议，我们试过了，真空抽滤只能除去一部分絮状物，滤后的料液还是比较浑，透光较低。没办法，又使用活性炭脱色，结果脱色抽滤后料液ph值又降低了，回调时又出现浑浊，奇怪的很啊