诱变选育注意事项

细履平沙

紫外诱变

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UV和氯化锂 (LiCI)复合诱变

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硫酸二乙酯 (DES)诱变

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用原生质体代替孢子作 为诱 变育种的材 料，可以提高诱发突变的频率和T作效率。上世纪70 年代抗生素产生菌开始运用原生质体形成、再生和融合 技术。现在诱变育种 作者已将这一技术作为抗生素菌 种选育的简便易行、提高效率的基本工作方法之一 。 一般认为细胞脱壁后 ，对外界诱变因素更敏感，更 容易引起细胞内遗传物质的变异。同时原生质体再生 也有个筛选过程，只有代谢和调控能力较强的细胞才 能再生，并形成孢子丰满的新菌落。目前尚未有结合 原生质体再生进行刺糖多孢菌菌种选育的报道

细履平沙

耐碳源分解代谢物阻遏突变株的理性化筛选
抗生素的生物合成易受快速利用碳源如葡萄糖等分 解代谢产物的阻遏，可采用葡萄糖的结构类似物2一脱 氧·D·葡萄糖选育 耐碳源分解代谢物阻遏突变株，从 而解除阻遏作用，

vevina

谢谢总版主的归纳总结！

zwq

老大怎么还要限制呀

liuzm83

看不了

青鸟

紫外诱变:紫外灯需预热20min，以稳定光波 ，且照射过程 必须在备有黄光或红光的暗室内进行 ，以免光修复。 另据国外报道．经过紫外诱变的菌体(特别是细菌和放 线菌)转入到无菌试管中，并立即浸入冰水中 l~2h，在 低温条件下．细胞内参与对突变体修复的各种酶类活 性受到抑制 ．利于提高突变效率。
UV和氯化锂 (LiCI)复合诱变:氯化锂单独使用没有明显的诱变效果．是一种助 诱变剂，氯化锂进入细胞后可以吸取 UV的能量 ，与 DNA分子结合而增强UV的诱变效应。 将经UV诱变处理后的刺糖多孢菌孢子悬液分别涂布 于含有0．1％、0．2％、0．3％、0、4％氯化锂的琼脂平板上， 30 培养8d左右，然后挑选菌落以待筛选。 为了避免氯化锂被破坏，当培养基温度冷却到 50 ~60 ：时才加入氯化锂制成平板。
硫酸二乙酯 (DES)诱变ES是一种诱变谱较为广泛的烷化剂，能与DNA 中碱基的磷酸部分发生烷基化作用，引起G：C和A：T的 互换 ，从而引起 DNA复制时碱基配对的转换或颠倒。 一定剂量的 DES对微生物具有致死性。目前倾向认为 在较低的致死率下，正向突变率更高。 DES在pH中性时诱变效应最好，故配制溶液和制 备菌悬液都要用0．1mol／L pH7．2的磷酸缓冲液。 用75％乙醇和DES原液配制成0．I％DES溶液，然 后取等体积的0．1％DES溶液和刺糖多孢菌孢子悬液混 和，30 0C振荡培养一定时间后，将处理后的孢子悬液 涂布于平皿，30℃培养 8d左右。最佳处理时间根据致 死率曲线而定 。

看完要谢谢斑竹

青鸟

补充一点，诱变选取对数期的细胞进行，菌种培养至对数期后稀释至一定浓度，酵母和孢子一般为100万/mL，细菌为1亿个/mL，采用物理诱变剂时，用生理盐水配制细胞悬浮液，而使用化学诱变剂处理时，采用缓冲液配制细胞悬浮液。
诱变后，为了克服表型延迟，须将诱变处理的菌液进行中间培养，将一定量的菌液接入完全培养基中过夜培养即可。
另外，诱变剂对身体有致癌性，一定要注意安全，做好防护工作。