微生物不可培养的原因

runancf

        对微生物进行常规培养时，由于生活条件的改变，有些微生物不能适应而死亡，另一些则通过产生孢子进入休眠状态或改变细胞形态、进入维持一定代谢活性但不生长繁殖的“活的非可培养状态”（Viable but nonculturable state，VBNC），结果均表现为微生物的“不可培养性”。实际上，微生物的不可培养性是由于对微生物生长条件及其规律性的认识严重不足，而采取了偏离微生物生长实际情况的培养条件所造成的，这些偏离具体可以包括以下几个方面。
1、采用高浓度的营养基质
     最初对微生物的培养是在富含营养的培养基中进行的，但是由于自然界中微生物数量庞大，其可利用的营养物质极度匮乏，多数处于“岔营养”状态。常规纯培养对这种认识不充分，通常将寡营养微生物迅速置于富营养状态，微生物初期的快速生长会产生大量的、微生物自身难以调节的过氧化物、超氧化物和羟基自由基等“毒性氧物质”（Reactive oxygenspecies），该类物质快速、过量的积累会破坏细胞内膜结构，导致细胞死亡，从而表现出微生物的不可培养性。
2、实验室中无法完全模拟自然界的环境条件
     由于目前监测技术和手段的限制，人们对微生物生存环境和自然条件了解尚不充分。因此，人们没有或无法完全模拟微生物的自然生存条件，而通常将培养条件进行简化：将微生物置于恒温、恒湿、黑暗等环境中；将微生物限制在“板结”的琼脂或不扰动的液体介质中；简化微生物的营养组成没有提供微生物生长繁殖所必需的某些化学物质，等等。所以在自然界中可以生长繁殖的微生物，在“纯培养”中生长条件得不到满足，从而导致了微生物的不可培养性。
3、环境微生物之间的相互关系被忽略
     微生物相互关系繁多复杂，包括：（1）种间的偏利共生关系（Commersalism）和互惠共生关系（Mutualism），两者的共性是至少一个群体提供另一些群体所需的生长因子而使微生物群体获利；（2）群体感应（Quorum sensing），这种关系被认为是通过细菌间的信息交流来调控细菌的群体行为：细胞通过感应一种胞外低分子量的信号分子来判断菌群密度和周围环境的变化，从而调节相应的细菌表达以调节细菌的群体行为。以上这两种关系都是微生物生长所必需的。由于人们目前对环境中微生物之间多数复杂的相互关系所知甚少，采用的培养技术没有将这种关系考虑在内：纯培养技术将待培养的微生物与其它微生物群体、以及生存环境人为地分离开，种间的共生关系和信息交流被阻断，微生物缺乏必需的生长因子和信号分子而死亡，表现出微生物的不可培养性。
4、生长缓慢的微生物被忽视
     环境中很多微生物都聚集生长，当将这些微生物接种至培养基时，适合生长的微生物由于生长快而占据优势地位，它们对营养成分的大量摄取使生长缓慢的微生物得不到充足营养而生长受到抑制。此外，对微生物生长状况进行判断的常规标准存在的缺陷，也导致某些微生物生长不被发觉，表现为“不可培养”。例如，生存于贫营养环境中的微生物尽管能够在低浓度营养条件下生长，但是有些微生物生长速度极为缓慢，在常规设定的培养周期内（例如1 周）没有长成肉眼可见的菌落就被遗弃。除此之外，还有一些寡营养微生物不会形成菌落，而是在固体培养基表面迁徙生长（Swarming growth）和扩散生长（Dispersal），它们形成只能显微可见的几个细胞组成的小型集合。这两种情况下，改变微生物生长的判断标准或者检测方法，就可以改变微生物的“不可培养性”。
      总之，导致微生物不可培养的因素有多种，有些是因为目前技术手段的限制，有些是因为人类认识水平的不足。克服这些制约因素，就可以较好地提高微生物的可培养性。目前，提高微生物可培养性的方式可分为两大类，即改进培养措施和开发新型培养技术。

runancf

再跟大家分享一篇文章，该文提出了一种研究不可培养微生物的方法，并利用实验找到了一些关于不可培养微生物方面的线索，是一篇非常不错的文章。

runancf

背景知识补充：Colwell 实验室在1982年提出活的但不可培养微生物的概念，他们发现将霍乱弧菌和大肠埃希菌转到不含营养物质的盐水中，经常长时间的低温保存，细菌会进入一种数量不减、有代谢活力、但在正常试验室培养条件下不能生长产生菌落的状态，称为活的但不能培养（viable butnonculturable, VBNC）状态。其后对多种属细菌进行试验证明，这种不可培养状态是普遍存在的。自然界中也广泛存在着这种活的但不可培养微生物，在各种生境中仅有小部分的微生物可用实验室方法分离培养，而未被培养的种类却代表了巨大的多样性。

jilsfh

xiexie

jianqiu

非常好的知识，筛选方法的改进很迫切啊，不知道楼主还有这方面的最新进展不？很想持续学习

jiabenwang

学习完毕。谢谢！