怎样破壁

gmcf2007 · 发表于 2009-6-19 12:29:04

大家好，我想问下就是如何破黑曲霉的细胞壁，我想提取里面的蛋白酶，在什么pH多少缓冲液中溶解，因为破胞方式很多，该怎么选择，谢谢

云中漫步 · 发表于 2009-6-19 12:48:43

超声波和溶菌酶以及其它！方法很多啊！

三可 · 发表于 2009-6-19 12:57:03

缓冲液应该根据你的蛋白质选择，可以参考下相关文献，最好事自己做实验确定。
破壁除酶法外还可以考虑机械法，比如说是冷冻研磨。

yzks · 发表于 2009-6-19 16:28:11

先洗涤至中性进行研磨，再水浴9小时加热破壁或置于灭菌锅内在0.1MPa，121摄氏度作用2小时。

yzks · 发表于 2009-6-19 20:32:45

黑曲霉蛋白等电点在pH在4-5之间，你要根据你的目的蛋白选择pH.

whbio · 发表于 2009-6-19 22:14:47

121度下2h蛋白酶还有活性？
高压破碎不知行不行。

三可 · 发表于 2009-6-19 23:24:09

引用第5楼whbio于2009-06-19 22:14发表的 :
121度下2h蛋白酶还有活性？
高压破碎不知行不行。

高温破碎显然是用于提取核酸的
黑曲霉属于丝状真菌，高压破碎恐怕不行

yzks · 发表于 2009-6-20 09:07:30

为了保持活性，那用超声波破碎吧

halfz · 发表于 2009-6-22 09:30:02

液氮研磨也可以的

gmcf2007 · 发表于 2009-6-24 14:48:12

应该不能高温吧，会失活，我想找个比骄温和的提取方法

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[酶工程] 怎样破壁