请教：增加拷贝数一定能提高产量吗

banjingyang · 发表于 2009-6-22 11:53:07

在相同的控制条件下，多拷贝菌株的产量没有原始菌高，这是什么原因造成的？是条件需要进一步优化还是多拷贝菌株的产酶能力不行？
增加目的基因拷贝数一定能提高产量吗？请各位多指教！

lxm5142004 · 发表于 2009-6-22 17:32:36

没有做过这方面的，只是自己的小看法.
提高拷贝数应该能提高产量，但是如果前面有限速的步骤，可能效果不是很明显。
提高拷贝数可能增加了菌体的负担，菌数少了，这样总体酶活可能没有以前高，建议测一下OD看一下菌浓的影响。
还是要继续优化吧，优化到最高产量看能达到多少。
如果产量实在是低，那只能放弃了，微生物是个系统，增加拷贝数也只能是个尝试。

chongqingydr · 发表于 2009-6-23 23:16:57

学习一下系统学有好处，如果简单的拷贝目的基因就能提高菌株的表达能力，提高产量的话，那么发酵这个行业就没有技术可言了，早就把有关问题解决了。

francis · 发表于 2010-8-25 09:05:37

不一定的。理论上能够，实际操作起来，不一定。因为微生物内部代谢及其调控太复杂了吧。

sulei · 发表于 2010-9-27 11:25:34

以前试过增加拷贝数来增加表达量，但效果一般。
可能是增加拷贝数后菌体负担太重，打乱了原来的代谢途径，使菌体生长失去平衡，提前衰老。而且出现了多条分子量差距很小的杂带，应该是表达不完全的蛋白，给后期纯化带来困难，所以后来我们放弃了这种方法。

月半湾 · 发表于 2010-11-25 21:06:37

谢谢分享!

fishlx · 发表于 2010-12-22 20:38:36

引用第4楼sulei于2010-09-27 11:25发表的 :
以前试过增加拷贝数来增加表达量，但效果一般。
可能是增加拷贝数后菌体负担太重，打乱了原来的代谢途径，使菌体生长失去平衡，提前衰老。而且出现了多条分子量差距很小的杂带，应该是表达不完全的蛋白，给后期纯化带来困难，所以后来我们放弃了这种方法。

我们实验室表达的蛋白通过提高质粒的拷贝数可以显著提高蛋白质的表达量。因此不能说增加拷贝数一定不行，主要还是看菌体的代谢，在不同的状态下代谢条件和对养料的需求不同。比如在试验中我们经常发现摇瓶小试的表达量很高而一旦放大到发酵罐中，虽然菌体浓度有所提高但是蛋白表达量却直线下降。因此不同拷贝数的菌体的发酵条件需要根据不同的菌种摸索

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