毕赤酵母筛选遇到的问题

巫雨 · 发表于 2009-6-25 13:41:51

打算利用毕赤酵母作为载体表达药物蛋白。前期质粒构建没有问题，只是转染后利用含G418的板子筛选，得到的菌株却不能正常表达蛋白，选取了40个单克隆都见不到有阳性结果。现在很困惑，不知问题出在哪里，还有就是如果不用药物筛选直接挑菌鉴定是否会有不同呢（G418太贵了）？请各位高手指点

tony524 · 发表于 2009-7-6 16:24:28

建议提取mRNA,利用反转录，看基因是否转录．
Ｇ４１８在筛选的时候利用最低浓度即可．

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[菌株构建] 毕赤酵母筛选遇到的问题