硝化细菌筛选问题

gvijgbyg

      菌种是公司保存的，一直没有做，最近拿出来活化。
   请教各位：
   1、硝化细菌是不是只在特殊培养基中才能生长，在肉汤培养基上不生长？
   2、有硝化能力的菌种在肉汤培养基上是不是都不能生长？

darcycao

硝化细菌是一类具有硝化作用的化能自养细菌，包括亚硝酸细菌和硝酸细菌两个亚群，其主要特征表现为：1.化能自养（除唯氏硝化杆菌的某些菌外），对底物要求专一性很强；2.生长缓慢，平均代时在10小时以上；3.好氧生长，O2为最终的电子受体；4.无芽孢，均为G-细菌；5.形态多样，同一生理亚群中的种类尽管生理学上共同性，但细胞形态多样；6.产酸性；7.依附性；8.二均分裂，大多数种类为无形的二均分类，只有唯氏硝化杆菌为芽殖法；9. DNA中G+C的百分含量范围较窄，硝化细菌的含量高于亚硝化细菌。由于硝化菌的这些特性，使得硝化菌的分离纯化有一定的难度，国内外尚未发现一种比较简单的分离纯化硝化细菌的方法。常用的主要有硅胶平板和水洗琼脂平板分离方法。其中，在制作平板时将平板放于室温下硅胶不易凝结，需放置于55度或更高的温度中才能凝结，硅胶平板锁水性不强在培养的过程中如不注意水饱和度的话极易失水龟裂，且在除氯的过程中平板的硬度不够，平板的制作过程复杂，得率很低，故对使用者的操作要求高。而水洗琼脂平板分离方法的操作简单，对操作者的要求低，平板的制作过程较为简单。

    硅胶平板与水洗琼脂平板相比各有优缺点，其不同点主要有一下几个方面：

1 性质不同，作用也不一样。就两者的性质而言，由于硅胶平板比较脆，因此硅胶平板更利于涂布，而水洗琼脂平板则利于划线；

2 硝化菌菌落的可确定性不同。涂布后硅胶平板上长出来的的菌落比水洗琼脂平板上的菌落稀疏，单菌落明显，易挑取，而水洗琼脂平板则能长出大量的伴生菌，因而很难挑到硝化菌单菌落；

3 培养时间的不同。菌落在硅胶平板上的生长所需时间远远多于水洗琼脂平板。故在实际操作中可先用硅胶平板进行稀释涂布，等长出单菌落后接种到水洗平板上不断的划线分离纯化与保存。

硝化细菌分离纯化的方法——水洗琼脂分离方法

目前大量的关于硝化细菌的研究是基于实验室纯化分离的硝化细菌来进行的。但由于硝化细菌生长速度缓慢，使得硝化细菌的分离纯化有一定的难度。这里主要介绍水洗琼脂的分离方法。

欲分离环境中的硝化菌，首先需在富集培养基中进行硝化菌的富集培养，在确定有降氮效果后在用分离培养基进行分离培养。然后再用水洗平板进行涂布和划线分离单菌落来达到纯化的目的。由于硝化菌的自养特性，因此，所需的富集培养基和分离培养基均由无机质组成。

水洗琼脂平板法的制作方法有以下两个部分：

1 琼脂条的预处理

将琼脂条用蒸馏水浸泡一周，其中换水、干燥7-8次，最后一次换水后烘干至恒重备用。

2 琼脂平板的制备

在硝化菌培养基的基础上加上2%的琼脂条于121℃中进行高温灭菌，待温度降低至60℃时在无菌超净台中倒平板，待凝即成。

水洗琼脂平板与普通的琼脂平板而言最大的区别就在于琼脂的预处理上。由于未经处理的琼脂条中含有相当一部分的有机质，因此，在涂布平板时会有大量的伴生菌生长起来，故对于挑取单菌落有较大的干扰。而琼脂条水洗后残留的有机质较低，相对而言，能减少伴生菌的生长，更易于硝化菌单菌落的分离纯化。

文章来源：华微生物(www.microhw.com)
作者：    Jully

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非常感谢一楼的解答。