液体菌种发酵过程的质量检测

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液体菌种发酵过程的质量检测  
文章来源：广东“农村信息直通车”新会综合服务中心      发布者：陆华权      

     采用浅层静置培养或利用摇床培养少量液体菌种，终止培养后，常用目测法检定，方法是将三角瓶摇晃静止后，如菌丝球均匀地分布于整个三角瓶中，发酵液清澈、无异味，有发酵所用菌种的特别香味，表示符合质量要求。如是采用发酵罐生产大量液体菌种，为了更好地控制培养条件，达到优质高产的目的，就需要对发酵液中的污染情况、菌丝体含量、菌丝球数量及代谢过程中酸度、总糖及还原糖、氨基酸、溶氧系数等的变化进行检测。现将有关的检测方法介绍如下。
　　1．污染的检查 污染的检查方法要求准确快速，及早发现，便于及时采取措施。常用方法有：
　　（1）显微镜检查 在发酵过程中定时取样（每隔6～8小时或12小时），用接种环取2～3环发酵液涂片、镜检，如发现异常菌体或菌体碎片等情况，说明已污染。
　　（2）划线培养检查 将样品在培养基上划线，置28～30℃下培养。
　　（3）肉汤培养检查 取发酵液1环接种于酚红肉汤培养基试管中，置28～30℃下培养，如溶液由红变黄，表明发酵液中染有细菌；如溶液红色不变，则无细菌污染。细菌酚红肉汤培养基配方：蛋白胨1%，葡萄糖0.3%，牛肉膏0.3%，氯化钠0.5%，酚红0.003%(酚红先配成1%的酒清溶液备用)，pH7.4～7.5，121℃灭菌30分钟。

　　2、菌丝体含量测定 取不少于100毫升发酵液，水洗至水相澄清，在砂芯漏斗上以已知60℃烘干重的滤纸真空抽滤，然后将菌丝体连同滤纸于60℃鼓风干燥2小时，迅速称重，精确至0.01克。 菌丝体干重（克/100毫升）={菌丝体干重（克）×100}/发酵液取样体积（毫升）

　　3、菌丝球数量及大小测定
　　（1） 菌丝球数量测定 取不少于50毫升的发酵液，按一定比例在带塞量筒中加水稀释，摇匀后取一定量在直径150毫米的培养皿中摊匀，培养皿下垫方格纸，用方格法计数。 菌球数（个/100毫升）={菌球数（个）×100}/相当于发酵液体积（毫升）
　　（2） 菌丝球大小测定 在培养皿中取30个以上菌球排成一列，测量总长度，精确至1毫米。 菌球平均直径（毫米/个）=菌球总长度（毫米）/菌球数（个） 对于发酵液中菌球只占一定比例者，可先测得菌球占整个菌丝体的体积或重量百分数，再测其大小和数量；菌球以球形或拟球形、直径大于1毫米、肉眼可辨者为准。

　　4、 酸度测定 采用氢氧化钠滴定法测定酸度。

　　5、总糖和还原糖测定 采用改良裴林法测定。

　　6、氨基酸态氮测定 采用甲醛法测定。

　　7、体积溶氧系数的测定 采用亚硫酸盐氧化法测定。