甲醛滴定法测定氨基氮

李晶 · 发表于 2010-1-24 19:37:18

甲醛滴定法测定氨基氮
一、目的
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。
二、原理
氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：
R—CH—COO-
+
是弱酸，完全解离时pH为11—12或更高，若用碱滴定一NH3，所释放的H+来测量氨基

酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使一NH3，释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内(pH9．0左右)。因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。
反应式见139页。
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量①。如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。
三、器材
1．25 mL锥形瓶 2．3 mL微量滴定管 3．吸管
四、试剂
1．0．1 m01／'L标准甘氨酸溶液 300 mL
准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。
2．0．1 mol／L标准氢氧化钠溶液 500 mL
3．酚酞指示剂 20 mL
0.5％酚酞的50％乙醇溶液
4．中性甲醛溶液 400mL
在50mL 36～37％分析纯甲醛溶液中加入1 mL 0．1％酚酞乙醇水溶液，用0．1 mol／L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。如已放置一段时间，则使用前需重新中和。
五、操作
1．取3个25 mL的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入2 mL 0.1 mol／L的标准甘氨酸溶液和5 mL水，混匀。向3号瓶内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2mL甲醛溶液，再混匀，分别用0．1 mol／L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。
重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的mL数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。
甘氨酸氨基氮回收率％= 实际测得量 / 理论加入量 × 100%
公式中实际测得量为滴定第1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数的平均值与3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14．008。
2 mL乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再乘14．008。即为加入理论量的mg数。
2、取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每ml甘氛酸溶液中含有氨基氮的mg数。
氨基氮（mg/mL）=
式中：为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。Mol/NaOH为标准氢氧化钠溶液的真实摩尔浓度。