重组型大肠杆菌发酵，发酵过程中重复出现问题。望高手求

byao222 · 发表于 2012-10-30 16:54:05

不止一次了，发酵从接种后一直很正常，持续4小时左右，溶氧降到了10左右，开始提高通气量，通气量的提高量并不高，但却造成了菌体停止生长。
最初以为是有噬菌体，所以发酵间清洁，整改都做了，噬菌斑验证后也没有发现有噬菌斑，以前做的时候也是按照这个操作规程做的，但是不知道为什么近期一直出问题。

gx0406 · 发表于 2012-10-30 20:29:12

pH等各项指标都正常吗？确保外界因素没问题后，验证是否菌种衰退了，做分纯；或是重组菌的遗传稳定性较差，发酵时有抗性吗？

byao222 · 发表于 2012-10-31 08:30:14

pH初期都是正常的，只有在提高通气量后出现了问题，（开始的时候通气量是1m³/h，因为4小时左右溶氧降的很低，我为了提高溶氧量，提升通气量至1.5m³/h），提通气量前，菌体的pH值持续下降，是稳定的现象，但我提升通气后，pH值停止下降了，溶氧量也出现回升，过了一段时间，pH值也回升

byao222 · 发表于 2012-10-31 08:33:10

菌种是稳定的。重新转化的，经多次活化后上罐的，摇瓶培养是正常的表达量良好。

byao222 · 发表于 2012-10-31 08:34:28

对菌体是有抗性的pET-41a，KAN抗性

pipwang · 发表于 2012-10-31 09:39:39

你以前操作的时候也提高通气量么？

byao222 · 发表于 2012-10-31 10:53:52

对每次都在这个时间段提高通气量，因为此时的溶氧下降到了10左右，以前做没有问题，但是自从上一个菌株出现了这个问题后，我们怀疑我们的环境有问题，所以做了整改，清洁；也曾怀疑是噬菌体污染，但用发酵液划板培养，培养出的菌体是正常的，摇瓶培养后进行诱导，表达也很正常

byao222 · 发表于 2012-10-31 10:56:05

也怀疑我们的培养基配方有问题。但是，我们的培养基配方用了1年多了，以前都能做出来啊。难道是我们的罐体有问题？？通气等设施，过滤器等设备上次都换新的了。但是不知道为啥。还会出现问题

hanjun80 · 发表于 2012-12-1 17:01:43

当通气量提高到一定程度以后，再提高就用途不大了。
此时，可以1）提高搅拌速率，这个比提高通气量管用的多；2）提高罐压，可以到0.05MPa左右；3）通高浓度氧气；

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