求助大肠杆菌高密度培养问题

gx0406 · 发表于 2012-12-11 11:23:12

你说的200~700mg/L是铵根例子浓度？我的意思是培养基中有机氮源含量的调节，发酵过程中的补料是另一回事。尝试做有机氮源含量梯度，有可能是氨基氮（游离氨基酸含量，区别于氨氮）含量不足，不能够菌体利用。因为本身有机氮源含量多少的确定也是矛盾的，既要维持低的比生长速率，又要保证菌体最大化生长

hanjun80 · 发表于 2012-12-11 13:04:43

我极少用有机氮源。因为这样的话，大肠杆菌比生长速率太高了。
200~700mg/L是指铵根离子浓度，由甲醛滴定法测得；

我们在无机盐培养基上，最高OD能搞到OD600=80（OD600=40时候开始诱导），但是那时候，大肠杆菌就开始分层。

我们现在的控制器没办法把溶氧与补料关联，现在是蛋白纯化、发酵、分子生物学都是偶一个人在搞，所以木有办法全程盯着呀……

gx0406 · 发表于 2012-12-11 15:03:07

嗯，多交流！

大龙王者 · 发表于 2012-12-13 16:56:04

你实际发酵几升的菌啊 OD达到30只是一般水平我做3L的发酵OD600能到80-100. 不知道你补料补的什么啊最好补甘油同时检查下你用的什么培养基磷酸盐缓冲液

安琪酵母 · 发表于 2012-12-15 14:43:02

建议更换补料方式，到后期不要再补氨水了，前期产乙酸太厉害，补氨水的量必定很大，氨水量大会导致发酵液中氨浓度太高，对菌体生长是不利的。
糖消耗量大是因为乙酸合成量大，但你又用氨水中和了。

hanjun80 · 发表于 2012-12-19 15:13:44

我每两个小时监测氨氮量，当氨氮大于1.5g/L时候，停止用氨水调pH，改用NaOH调节pH。

安琪酵母 · 发表于 2012-12-27 11:56:21

试下补一点有机氮源试试，pH到后期最好能够通过补糖来控制。

wxh11 · 发表于 2013-4-21 22:32:34

这个值得研究，好好学习一下。

feng100 · 发表于 2013-5-9 16:49:43

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