芽孢杆菌发酵菌种数如何达到最大

sodoya121 · 发表于 2014-1-11 12:36:55

本人最近一直在做芽孢杆菌类的扩培，主要为地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，具体做法：
菌种复壮，划板15次左右，单菌落克隆传代，培养基为牛肉膏蛋白胨氯化钠：0.3:1:0.5，37℃，18h，恒温培养箱
摇瓶种子：取一环平板单菌落，到50/250ml  三角瓶中，37℃，180ram ，培养18h。培养基为牛肉膏蛋白胨氯化钠：0.5:1:1.
摇瓶发酵实验：
从9种培养基中选出一种表现较好的：培养基为玉米粉豆粕粉葡糖硫酸铵：3:2:0.5:0.2 PH 7 35℃ 180ram  24h
地衣芽孢杆菌：菌种计数：摇瓶种子为2.25*10的9次方，
摇瓶发酵实验接种量1%，装液量50/500ml  菌种计数平均  8.5*10的9次方，以上实验重复6次，芽孢形成很少，约在10%左右。发酵终了PH7.24，
枯草芽孢杆菌菌种计数：摇瓶种子1.5*10的9次方，摇瓶发酵实验菌种计数平均6.5*10的9次方，芽孢形成较多，50%以上。发酵终了PH6.89. 发酵条件同上。
上罐实验：
地衣芽孢杆菌10L自动不锈钢发酵罐，培养基同摇瓶发酵实验培养基，就是玉米粉那个
发酵条件：  装液量6L/10L，通气量1.5vvm（每升发酵液每分钟通气1.5L）接种量1%，温度35℃，搅拌桨200ram，初值始PH7，中间不做调节。
发酵数据：DO值在发酵第6个小时迅速下降，第9个小时掉到0,一直持续到第30个小时候开始回升。
               PH值在发酵第6个小时开始下降，到5.34，到24小时回升到6.9之后再此值左右开始徘徊，直到发酵48h发酵终止。
               菌种计数在18h取样，2.7*10的9次方，芽孢很少。24h取样3.8*10的9次方，芽孢很少。都少于10%。
               36h取样，4.05*10的9次方，芽孢很少。48h取样，3.5*10的9次方，芽孢少。
枯草芽孢杆菌上罐实验还未完成，这里地衣芽孢杆菌的芽孢形成少，本人分析是可能加入硫酸锰后会好些，在做培养基筛选时，在有一种培养基中加入0.05%的硫酸锰后，芽孢形成率达到90%左右。
这里向大家求教的是，上罐实验后，菌种数量一直上不去的原因？在摇瓶发酵实验时，已经能接近100亿，发酵罐的条件本来会更好些，但是菌种数量却下来了，这期间，我还做过一次，用牛肉膏蛋白胨的培养基上罐发酵实验，也是这样的情况，当摇瓶发酵能达到2*10的9次方时，而同一批种子接种的发酵罐只能到1.22*10的9次方，也是不如摇瓶实验。
上罐实验中，PH都是没有做干扰，就是不用酸碱调节，这可能是原因之一，只是摇瓶也不做调节，两者却相差3倍，不知大家有过这经历没。
希望大家能不吝赐教，或者有更好的培养方法或者配料，不胜感激。
我把我曾经筛选过的培养基写下来：
1号，玉米粉豆粕粉硫酸铵葡糖
2号，葡糖，磷酸氢二铵，氯化钠，磷酸氢二钾，硫酸镁，氯化钙，硫酸亚铁，硫酸锰
3号，氯化钠，硫酸镁，磷酸二氢钾，豆粕粉，淀粉。葡糖，玉米浆
4号，葡糖，尿素，硫酸镁。磷酸氢二钾，玉米浆，硫酸亚铁，硫酸锰
5号，牛肉膏蛋白胨，氯化镁，玉米粉，蔗糖，淀粉，硫酸亚铁，磷酸二氢钾
6号，蛋白胨，酵母粉，氯化钠，硫酸锰
7号，蔗糖，蛋白胨，氯化钠，磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸亚铁，硫酸锰，
8号，玉米淀粉，糖蜜，豆粕粉，硫酸铵，氯化钠，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，硫酸镁