菌种质量控制的突破口

细履平沙

昨天将上次题目为“发酵技术管理的核心是控制”的贴子重新编辑了一下，发表在了公众号上。感觉还有必要对这一问题进行更细致的展开。今天就以菌种质量控制开始吧。
思路可能不太顺畅，后面会重新理一下：
菌种质量影响因素会很多，内在的因素：比如这一菌株是否更容易突变，质粒是否更容易脱落或者在传代时丢失。
外在因素无外乎人、机、料、法、环。 这一方面需要合适的设施，也需要合理的管理，也就是按照GMP要求进行全面管理。但是目前很多企业虽然推广GMP，但是很多时候过于生硬，所以管理起来，从上到下都很累，而且因为工作量很大，所以一些环节可能没有被重视。

细履平沙

接续：
从产品形成的角度上可以将企业分成两部分，一部分是研发，另一部分是生产。前者从本质是求变，结果差别越大越好，而后者本质上是求稳，结果最好不变。知道了这一点，公司就不应该以产量为主要评价指标来衡量车间的管理水平，因为这样就会促使车间进行各种试验，后果是改变原工艺。有人会说如果不以这样的指标衡量车间，那么车间怎么管理呀，产量怎么实现呢？
     就像目前中国GDP的指标已经深入人心了，如果没有，各方都不满意。不扯远了，还回到我们企业。如果不以产量为衡量指标，而以染菌率，批产量波动情况为主要技术指标，以成本为经济指标来称量。这样生产车间就会将眼光集中到控制上，而不会再侵占研发的工作职责了。

细履平沙

接续：如果我目前还是车间的技术人员，可能还是在思想上过不了一道坎：如果都是求稳，还要高级技术人员做什么，如果高级技术人员每天都做一样的事情是不是特别没劲呢？
但是这就事实，车间不同于研发部，如果高级技术人员感觉做以下这些事情没有价值，那么就应该申请调到研发部。
       车间控制的关键是菌种的控制，菌种控制的关键衡量指标是摇瓶发酵单位是否一致。为什么？
菌种是关键，是众所周知的事情，不再赘述。那么为什么摇瓶发酵单位是衡量菌种的关键指标呢？
       菌种在进入下一个工序，比如青霉素的米孢子直接接到种子罐，如果没有经过验证是不可能的事情，因为风险无法承担。
所以种子进罐之前，肯定需要验证，验证的最好方法应该是摇瓶试验。当然在接种发酵罐的时候，接的种子也会留一些验证无菌和发酵单位，作为死后验尸的方法。不能说死后验尸没有作用，如果少了这一步，种子的评价指标就会缺失。

细履平沙

摇瓶的优势我今后再写贴子进行综述，今天不再这里详述了。
摇瓶验证与之前没有差异，便可以说明这一菌株或制备的本批菌种可用。很多企业只衡量摇瓶效价，如果低了就不行，高了可以。这样的衡量太过粗糙，而且当生产出现波动时，很难分析到种子。
那么如何才精细呢？下面我给些提示：
1、种子质量衡量指标需要调整。既然做完了一批摇瓶发酵小试，就应该多设定一些检测指标，比如发酵液的体积，菌浓，效价及 pH,总糖，总氮等，如果还能测测发酵液的其他指标，则更好，越多越好。高级技术人员可以来分析这些指标，确定哪些是关键指标，哪些不是关键指标，哪些指标能控制，哪些指标不能控制。总之只能确定好了关键指标，才可能采取恰当的控制手段
2、控制方法。如果我们将摇瓶间的差异控制好了，那么效价才可能作为衡量菌种能力的指标。其他指标的控制当然很复杂，需要很多策略，比如瓶放置到培养箱时，如何才能保证随机。本论坛上已经介绍了很多细节，大家可以找找，后面我也会整理。
3.如何保证每次接种时，接种量一致？最初应该是从斜面上取种子，取种子应该是以面积计算的，如何保证取的面积一致，需要企业想办法，不同的公司肯定有不同的办法，这些是从实践中摸索出来的诀窍，如果本步做不好，下面的工作就无法保证。取了种子后，有些公司直接接到摇瓶里，开始培养，只做一次测试。有些企业会先将那片斜面用无菌水处理一下，使琼脂表面的种子尽量转到液体里，然后取一点进行计数，然后不规则接到3个摇瓶中进行发酵。后者会涉及如何保证每次琼脂表面的种子能够一致的转到液体里？如果不一致，则可能进行一定的稀释，保证常年都按照这一浓度进行摇瓶测试。这样做比直接琼脂块接种的优势在于摇瓶的结果更反映单位菌的能力，但是增加了一步操作，引入新的不确定度。

细履平沙

如果种子罐是用液体菌接种的，那么种子合瓶后，每瓶剩余一点，一方面进行无菌检测，另一方面进行发酵小试复测，检测不同瓶的种子之间的差异。如果公司给车间的指标定为批间差异，那么车间很可能将种子的这个瓶间差异定为种子衡量的指标，如果这个执行的话，那么种子组就一定会更加重视管理水平的提高，而不再是变异种子，提高产量了。

细履平沙

如果车间管理开始真正执行GMP标准，高级技术人员觉得无用武之地，那么除了去研发部外，在车间也可发挥重要作用，展示风采。高级技术人员可以作为车间与研发部沟通的桥梁，在下述工作中发挥作用：
1、设计如何保证划斜面时，每次都能一致，让单位斜面面积上的菌保持一致。
2、设计试验验证，每次取一样的面积接种更稳定，还是调节菌体的浓度接种更稳定。
3、对摇瓶结果进行统计，首先解决瓶间差异大的问题。分析摇瓶结果不稳定的原因，然后制订采取的措施。比如摇瓶结果不稳定是蒸发量不同导致，那么就要找出蒸发量不一致的原因，再采取控制。比如控制湿度，或改进瓶塞等。再比如摇床不同位置导致发酵结果不一致，那么就要通过验证试验，找到位置上是哪个因素起了作用，然后再采取措施削除这些影响。走到位置不再影响发酵。当瓶间没有差异时，摇瓶结果才可以说反映了种子的生产能力。
4、确定原料的指标，特别是复合原料。当摇瓶结果随着更换原料批次发生变化时，高组技术人员就要找到哪个原料是关键原料，其标准如何建立？复合原料特别是氮源，如果有很多指标，那么就需要高级人员去分析哪些指标是关键指标，能够作为厂家的原料标准。这样当原料批次产生变化时，就不会过多的影响种子的验证指标。

细履平沙

复合氮源的检测指标最好包括金属元素，各氨基酸浓度，维生素等，指标越多，越可以找到哪些指标是关键指标，找到后可以将这些发现反馈给研发部，让他们制订新的原料采购标准，这一措施也是解决大生产稳定的关键。
车间与研发在一些工作上完全可以沟通和协作。为了稳定试验设计应该属于车间的探索范围，比如设计试验找到影响瓶间差的原因。比如通过摇瓶试验筛选复合氮源，使培养基更稳定。进行设备验证，保证设备各点对种子瓶影响一致。
车间各个岗位也都可以效仿，但是车间管理者要为每个岗位设计考核标准，考核标准会引导岗位向车间管理者的要求改变。
结尾的话：办法总比问题多！

vei_20004

好久没来了，继续学习

dengjian2016

写的非常详细，学习了

江中

很不错