过程检查是无菌的保障

细履平沙

优良的效果是设计出来的，但是对于设计已经完成的车间而言，管理就是无菌的重要保障。管理措施包括两种手段
硬件上的改造
法规要求的改造必须要实现
在资金力所能及的情况下，对风险最大的染菌源进行处理，如果能在关键环节设立监控是更有效的保证措施，一方面防止菌种流失，另一方面可以让大家观摩学习，从中找到好的经验和不良的操作习惯。
软件上的提高
除了加强培训提高人员的业务能力外，增加过程检查往往是最有效的措施
一方面见效快：查出问题，及时纠正，使存在风险即刻降低，包括查出部分人员习惯性危险操作；
另一方面效果持久，因为通过检查点，在相关人员大脑中增加了提醒设置，每当进行相关操作时，精力都能集中。否则即使老手也可能出现马失前蹄的时候。
以下归纳了应该设置的重要检查方法：
涉及发酵污染关键操作涉及种子制备，接种，培养基灭菌，设备检修，过程控制等环节，影响最大的因素是涉及人员的行为。而影响人员行为最关键的因素就是设立关键环节的检查点。以下根据本人的经验，介绍一下各个重要的检查点，及检测方法。
1、种子制备阶段的操作
保存在MCB或WCB中的种子是否无杂菌。在制作MCB和WCB之后，一定要有严格的放行检查，放行检查并非只是对最后的检测进行核对，而是要进行一个回顾的核对，包括核对环境指标，灭菌效果，斜面等直接使用影响无菌状况的培养基的无菌情况，及混悬液的镜检和留样无菌观察。每一步出现问题，都不能放行。
2.2使用WCB制备种子：WCB因为在制备过程经历了斜面培养，取斜面培养物，液体浊悬，分装，检测放行，入库等过程。如果WCB中含有微量的杂菌，在WCB使用的时候也可能被忽略，所以从WCB的制备过程就要非常小心的进行无菌的检查，斜面使用前是否有杂菌，内壁的蒸汽是否过多，无菌环境及工作服是否符合要求。分装时间可能会比较长，在操作过程中发现不符合要求时及时提示，比如操作的器具是否接触非灭菌物品，是否超出了超净台要求区域等。放行检查也不等于纸上的放行，过程监控的回顾也是重要的内容。
2、种子合瓶上罐操作
种子合瓶用具和操作尽量减少，因为涉及敞口操作，所以环境控制是重要点，也是重要的检查点：包括洁净服的灭菌，无菌室的环境检测指标等。这些指标合格后，才能够进行合瓶操作。
合并之后的接种操作，如果是火焰接种，因为也是敞口操作，所以环境控制是重点，如果是压差操作，一是要注意检查接种瓶上呼吸滤头的完整性，还要检查接种过程开关阀门的顺序。
3、发酵罐的灭菌
灭菌操作过程中未严格执行操作规程，检查不到位，清理不到位而导致染菌是最关键的问题。如放罐后对罐的清洗工作不彻底，尤其是罐顶封头、蛇管背面、搅拌叶下方等部位积存的料未彻底清理干净。灭菌过程升温太快，空气未排尽，形成“假压力”，或温度电极漂移未校正，致使实际灭菌温度不足。蒸汽阀门开度不合理，或有的蒸汽阀被忽略未开，造成罐内蒸汽流动不畅，形成死角。灭菌过程中操作过快造成泡沫顶罐，导致灭菌参数无法正常控制。空气高效过滤器灭菌操作先后顺序不对，造成物料从空气管倒流污染滤芯，或灭菌温度过高，持续时间过长而造成过滤器滤芯损坏等等。
针对发酵罐灭菌中可能存在的问题，也需要设立检查点，除了回顾性的查阅设备检查，清洗记录和灭菌记录，还要对灭菌后的培养基进行留样观察。但是取样如果是敞口操作，那么作为培养基染菌在定性判断的功能上就会大打折扣，所以一般使用可在线灭菌的取样装置。

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除了在灭菌完成后进行无菌取样外，发酵过程也需要定期取无菌样观察，比如12小时一次取样，然后接种到无菌培养基中，镜检观察等。对于发酵中出现的杂菌，还要进行无菌培养基的生长检测，如果杂菌在无菌培养基中不长，那就可笑了

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不要将放行当作最后一个指标复合要求，而是当作是一个回顾性检查的过程，这个过程好比列出一个关键点检查表，一个一个的去核对，全部检查完了，再进行放行。其实这个表可以设计成两列，一个是现场检查，一个是回顾性检查。

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最近正在头疼染菌的问题，版主的内容还是有启发作用的