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发酵人社区，发酵技术论坛，发酵产品，发酵工艺，发酵服务»论坛 › 微生物版块 › 菌种技术 › 菌种复壮对质粒量的影响有多大？

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[培养保藏] 菌种复壮对质粒量的影响有多大？

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发表于 2007-4-16 21:15:11 | 显示全部楼层 |阅读模式

大家好，刚刚从事微生物发酵这一行业，有很多事情都不懂，工作中遇到很多问题，请大家多多指教。
我们做的是BAC质粒，拷贝数很低，所以质粒含量很低，以前我们每升摇瓶菌液能得到大概80ug 的质粒，后来买了新摇床，菌种又进行了复壮，现在可以得到160ug质粒，不知道是因为提取质粒过程中工艺提高了，还是因为摇菌条件改变了，还是因为菌种复壮的原因。上边有要求我们尽快分析原因，得出稳定的工艺条件，很头疼，请大家帮我分析分析。谢谢！

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发表于 2007-4-17 07:41:28 | 显示全部楼层

那就进行一下组合实验,如用旧菌株在新摇床上进行.这样一步步就找到原因了.

欢迎关注发酵人自己的微信号: comefajiaoren

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发表于 2007-4-17 08:46:20 | 显示全部楼层

what do you mean "复壮"?

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楼主| 发表于 2007-4-17 20:02:44 | 显示全部楼层

复壮，我的意思就是将原来的菌液划平板，挑选单克隆在进行平板印记，再摇菌、检测其质粒含量，如果质粒量高的话，就将印记再摇菌，保存备用。

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楼主| 发表于 2007-4-17 20:51:34 | 显示全部楼层

谢谢！

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发表于 2007-4-18 00:16:45 | 显示全部楼层

BAC质粒比较大, 可能不太稳定, 多挑几个colonies (50?), 比较其产量. 注意记录OD, pH. 经过4-5代, 如果还不稳定, 换host试试.

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发表于 2007-4-18 10:29:36 | 显示全部楼层

"用菌液划平板，挑选单克隆在进行平板印记"就相当于自然的分离纯化.原来80,现在160,应该是原来的菌种不纯.通过划平板,挑出了纯的高单位的菌株.

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楼主| 发表于 2007-4-19 17:18:58 | 显示全部楼层

我们的菌还存在这样一个问题，就是菌的量上去了，而质粒量却没有提高！是不是生长过快的原因？

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发表于 2007-4-23 20:22:41 | 显示全部楼层

同意五楼的见解！可能是挑到宝贝啦！！！大海里面一不小心捞到了针！

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发表于 2007-5-28 16:58:32 | 显示全部楼层

质粒拷贝数和宿主菌比生长速率有关系，一般比生长速率过大的话不利于质粒复制。

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