求助：发酵加碳源问题

寻找碎玉 · 发表于 2007-6-26 15:16:48

我是刚开始学发酵的，现在用摇瓶摇菌，IPTG诱导后不知道什么时间加糖，怎么间隔？望高手指点，谢谢。有人用血糖仪检测的，这样成本太高，有没有别的方法！

yshijing · 发表于 2007-6-27 14:12:34

我的土办法是:
观察pH和溶氧,若两个同时快速升高就可以开始补糖,若两个参数下降太快就将速度调慢

zhj_27 · 发表于 2007-6-29 01:12:06

pH和溶氧应该是指示，但诱导后葡萄糖不宜多加吧

苍凉之水 · 发表于 2007-7-1 22:27:43

通过PH和溶氧的指示是可以判断的，不过最好通过还原糖浓度检测进行判断不容易出错

寻找碎玉 · 发表于 2007-7-6 14:43:21

溶氧怎么看出来呢？用什么测？不好意思！谢谢大家不过yshijing，“观察pH和溶氧,若两个同时快速升高就可以开始补糖,” 为什么pH快速升高就开始补加糖？我的观察是：加过糖后产酸增加，pH下降得快，6小时内不再加糖，pH下降的就慢了，是不是要加糖让pH一直保持大幅下降，那样氨基酸产量就大呀？
zhj_27 说诱导后糖不宜多加？是真的吗？那要怎么加呢？谢谢！

remmoon · 发表于 2007-7-6 15:23:04

推荐你看一篇文章吧，我也是刚从摇瓶开始做发酵罐的发酵

溶氧和pH一起升高意味着发酵罐中碳源消耗完了，因此可以考虑开始诱导或者补加碳源，这篇文献中就是建议在溶氧从0%忽然上升到80%时候开始诱导，诱导后如果流加葡萄糖很容易产生只张菌体的现象，可以考虑用甘油代替，我也是从中得到了很多启示

西风 · 发表于 2007-7-8 20:23:42

我们用葡萄糖试剂盒，挺便宜的
需要物品：1，酶标仪
2，毛细管（一般取样是10微升）
37度15分就可以知道结果了

zhj_27 · 发表于 2007-7-9 16:33:10

溶氧从0%忽然上升到80%时候开始诱导,是不是菌体密度太小了！

一般碳源消耗后产酸，一些氮源是生理碱性物质，pH上升不一定是糖消耗完了，可能是当时谁占主导的问题，但应该可以说明糖消耗得差不多了，最好当然是通过检测的方法来确定。

诱导后补糖多少，我觉得不同的系统可能情况会不同，比如lac,tac启动子系统是受G抑制的。而且过多的G，需要要好大量的氧，可能产生大量菌体，乙酸，不利于产物表达。[move]上升[/move]

寻找碎玉 · 发表于 2007-7-11 19:50:27

谢谢remmoon的文章！非常感谢大家！

slyh · 发表于 2007-7-13 10:05:37

从溶氧、测糖含量均可，还可以从PH判断。当PH在下降到一定程度而又开始回升时，培养基中的糖已基本消耗完，应开始补料。

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