大家说说活细胞计数有几种方法

西风

1，平板计数法，最经典的计数方法，
  优点：直接计活菌数
  缺点：人为误差大、耗时长
2，血小板显微镜计数法
  优点：直接计活菌数
  缺点：要求细胞体积比较大、也有人为误差
3，od值法
  优点：快捷、误差小
  缺点：活菌死菌一起计，分不开死活，须作标准曲线（od与平板计数），
  培养基必须无除菌体以外的沉淀
4，mtt活细胞染色法（用酶标板测）
优点：方便、快捷、只计活菌数
缺点：只对某些细菌可以
（对干酪乳酸菌就不行，做不出标曲来）
这是我用过的方法，但是后来也只用平板计数法最多了，其它方法除od值法外就用不了，
不知各位还用什么办法呢？
抛砖引玉啊

bigallen

在有一篇求助中,平沙兄提示过----流式细胞仪
标记死细胞之后计量
我也发了区分细菌的死活，可采用活体染色法的答复.
我想既然能使之颜色有区别,就可以比色定量.
见http://www.fajiaoren.com/read.php?tid=5323

西风

谢谢二楼bigallen
什么是流式细胞仪啊？
有什么用途？
我的是乳酸菌中的干酪乳杆菌

bigallen

现代的流式细胞仪每秒可以实时检测几千个颗粒，并且可以主动分离具有不同特性的颗粒。
流式细胞仪和显微镜比较像，但能够对大量的单个细胞利用一组参数进行高通量的自动量化。固体组织需要在检测前制备成单细胞的悬浮液。
原理： 一束单色光（通常是激光）照到流体力学聚焦的一股流体上。若干个检测器瞄向流束和激光相交的这个点，其中一个和激光在同一直在线（称作前散射(FSC)），其它几个和激光垂直（旁散射(SSC)和一个或几个荧光监测器）。当每个悬浮颗粒通过光束时会按某种方式把光散射，同时所带有的荧光化合物被激发并发射出频率低于激发光的荧光。这些散射光和荧光的组合数据被检测器记录，根据各检测器亮度的波动（每个细胞会显出一个散射或荧光的峰）就能够推算出每个颗粒的物理和化学性质。前散射与细胞体积相关，而旁散射取决于颗粒的内部复杂程度（比如核的形状、胞质内颗粒的种类或者末的粗糙程度）。

bigallen

你是想检测培养基单位体积的活菌数吧，这个我还真没有效办法，我想用活体染色法的颜色比较怎么样。
活体染色就是用对微生物无毒性的染料，如美蓝、刚果红、中性红等，配成一定浓度，再与一定量的菌液混合，经一段时间后，死菌和活菌会呈现出不同的颜色，这样便可在显微镜下区分开来。

你看颜色深浅不是很好反映问题了么？

西风

在试验先处死一部分菌体,然后和活菌作对比,看看究竟颜色有什么变化
然后在镜检.
能不能比色呀?

bigallen

嘿嘿~~比色我也没试过，不是指望西风兄去勇当开路先锋么！！！