重组大肠杆菌三级种子库建立问题

nustpolo

本人刚从外边获得一株重组大肠杆菌，现急需建立种子库（原始种子批、主种子批、生产种子批），按照资料上所说，传过几代的基因工程菌很容易发生变异，但是在建库过程中，肯定需要鉴定菌种的性能，这就必然涉及到传代问题，因此，本人对这个问题一直很困惑。希望哪位大虾指点迷津，告知建库过程的详细操作步骤，不胜感激！

leazyming

我们现在也在进行种子库的建立。使用的方法是用原始菌划平板，挑选合适的菌苔使用印记法，一方面检测菌的性能，一方面留有印记i，如果检测性能优良，就选择与之对应的印记进行菌种保存。
不知道我说明白了没有，以后可以慢慢交流！

pf821

我也是做工程菌的,也有同样的疑问,因为工程菌和其他的菌种不太一样,工程菌涉及到质粒不稳定性和突变性,应该是传代越少越好,确实与菌种鉴定有矛盾,我觉得鉴定后尽量少传代,在不影响活力恢复的基础上尽早上罐,另外可以做一些质粒稳定性试验,看看你的工程菌是否稳定,来决定传代的次数.
我以前做的工程菌稳定性比较差,传不了几次就需要重新转化制种,否则产量降低很多.

zhanghongwei

对于重组大肠杆菌菌种的原始种子，首先是进行一些列的鉴别试验，主要是看重组质粒的正确性，然后冻干种子。
对于原始种子建议做穿代稳定性的研究（平板和摇瓶传代，并定期检测，找到一个合适的传代代次，一般20代应该没有问题），在此基础上做一批主种子。及工作种子，所谓的3级种子。关于鉴别的内容在《中国药典》和ICH中都有详细的介绍，可以参考。另外根据菌种特性及保存条件的特性，也不一定要建立3级种子库，如可以做2级种子，但一定要有充分的理由。