溶菌到底是BL21(DE3)plysS的问题还是目的蛋白的问题?

pf821 · 发表于 2007-8-2 15:17:19

我们的基因工程菌BL21(DE3)plysS是由客户构建,蛋白是一种未知蛋白,客户未说明,需要我们发酵表达,但做了3-4批,每次都发现溶菌现象,出现很多碎片杂质,且在前期摇瓶预培养的时候就发生这种现象,同事认为是BL21(DE3)plysS菌株表达T7溶菌酶会产生溶菌现象,但我以前也曾经拿这种菌株做过另一种蛋白表达,没有发现有这种溶菌现象,我想问问会不会是目的蛋白有毒性,然后引起溶菌,请各位有经验的指点一下,急!

chzhi163 · 发表于 2007-8-2 21:34:16

顶上去,期待解读中,没有接触过娇嫩的基因工程菌,我对我单位的原始菌基因背景还不知道呢!!说是保密中0...!@

lordriki · 发表于 2007-8-3 11:02:14

溶菌也有可能是感染噬菌体了吧？

pf821 · 发表于 2007-8-3 15:23:27

不会是噬菌体污染,因为连多次摇瓶预培养的结果都有溶菌,其他菌种未有这种现象

815176867 · 发表于 2007-8-6 08:59:18

是不是诱导过度呀

pf821 · 发表于 2007-8-6 11:09:06

应该不是吧,连预培养都发生大量溶菌,不知道是怎么回事

shouren07 · 发表于 2007-8-7 15:12:13

我做过该类菌的发酵工作，虽然溶菌很严重，但该表达系统让目的蛋白表达量提高，所以还是采用了。避免溶菌，可以先试一试低密度发酵，再逐步提高发酵密度。也有文献上说，用乳糖作碳源发酵BL21(DE3)plysS基因工程菌。

pf821 · 发表于 2007-8-8 14:34:27

楼上的，你们溶菌的时候表达的是毒性蛋白还是非毒性蛋白？我们曾经用过BL21（DE3）plysS表达另一种非毒性蛋白，但是从来没有溶菌的现象，而且完全可以采用高密度发酵？另外，用乳糖作碳源是什么原理呢？可否略微解释一下，谢谢

journeysky · 发表于 2007-9-4 12:11:29

是不是感染噬菌体了？

zhj_27 · 发表于 2007-9-8 09:38:08

plysS菌株表达T7溶菌酶可能会产生溶菌现象

另外，培养条件到后期是否已经恶化，导致细胞衰老自溶。
目的蛋白的高表达导致细胞负荷过重，可能也会导致细胞自溶。

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