请教大肠杆菌工程菌培养基的问题

wanying · 发表于 2007-8-16 12:13:50

我是一个新手，没有做过发酵罐。我现在做的工程菌产物是酶蛋白。只是在摇床上用LB培养得到产物，为了提高产量和酶的活性，现在要上2L的发酵罐。不知道培养基应该怎样优化？想请各位专家帮忙指点！谢谢！

austin2008 · 发表于 2007-8-16 20:58:36

先做摇瓶的响应面优化,再根据摇瓶中的结果一些主要影响因素在发酵罐中做一个均匀设计优化

wanying · 发表于 2007-8-28 13:57:13

关于响应面优化能说的具体点吗？
还有我的是工程菌，上发酵罐就用LB培养基是不是可以啊？
我现在在摸索条件，不知道我思路是否是对的。我首先在罐上测定工程菌的生长曲线，然后诱导，选取最佳诱导时间和最大表达量。我觉得这样做只能提高产量，要是提高酶活的话应该怎样设计实验呢？
我看到好多资料上说，大肠杆菌诱导要在OD600为5-10的时候才可以，但是我测定生长曲线发现只长到2点多的时候就衰亡了，这种现象正常吗？

pf821 · 发表于 2007-8-28 14:50:27

楼主握个手,我也是做工程菌的,QQ是40627167,有空多交流,如果是大肠杆菌可以直接用LB,但是产量不一定高,
要看具体的菌种和具体的蛋白,先做摇瓶优化是王道,
你的OD2点多衰亡是有点问题,我做过4种工程菌,最少OD都在10以上,摇瓶都能达到4以上,建议你先考查菌种,是新转化的还是传过许多代的,如果是传过许多代的就重新转化看看,如果新转的种子就衰亡那很可能是你的菌种或蛋白的问题,换个菌种试试.

wanying · 发表于 2007-8-30 16:52:02

感谢三楼提的宝贵意见!我的菌种是传过好多代的。难道每次发酵都要重新转化吗？
我的QQ:115079224.希望多交流.

风后听竹 · 发表于 2007-8-30 17:22:13

我建议谁能创建了QQ群
全是关于发酵的，
到时候我一定参加，相信这个群一定很强

pf821 · 发表于 2007-8-30 20:34:56

回楼主,不一定每次发酵都要重新转化,可以适当传代,但工程菌种传代太多就会有退化衰老的问题,所以要看你菌种情况而定

wanying · 发表于 2007-8-30 22:07:12

各位盟友们,我建了一个发酵人QQ群,希望大家踊跃参加,互相交流经验.申请加入的时候要写自己在论坛的名字哦.

xff9178 · 发表于 2007-9-5 18:09:07

群在哪里啊，我也要做工程菌

wanying · 发表于 2007-9-7 16:16:08

发酵人的ＱＱ群：４５９２４８０９
希望大家积极发言

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