菌种选育问题

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因为发酵产物是胞内产物，想分离出细胞通透性高点的菌种，哪位大侠有相关经验给予分享吗

chzhi163

欢迎新朋友!既然是胞内产物,分离出细胞通透性高点的菌种还有必要吗?胞内产物的提取也应该有了破壁后提工序了吧!你难道想改掉这些吗?分析一下代谢,是胞内的在胞内尽量的出产量一样啊!设计相应的后提就好了!

个人拙见!呵呵

细履平沙

使细胞壁不完整，比如：在培养的时候加一些青霉素。碳酸钙也能增大细胞壁的通透性。另外也可以设计筛选模型。大家可以谈谈如何筛选模型，这很有意义！

mission

如果是小分子的话，着重于后期提取更为上策。当然你也可做random mutagenesis,screening胞外产物.

If you you knew the transport of your compound, oervexpress them will help.

如果是大分子 （protein)的话, 选一蛋白(beta-G, fluorescen protein, alkali phosphatase....), 做random mutagenesis, 选出几株胞外高产株，然后再把自己的蛋白放进这些菌株.

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因为本身就是抗生素生产菌，自己是觉得如果添加青霉素的话，
对菌种的生长代谢，产物合成，生测效价可能有影响，
如果产生的抗生素不能更多的释放出来，就要筛选更高抗自身抗生素的菌种，
当然也是要筛选抗性高的菌种，希望多些工作可以尝试

fazchen

这个有时候是有摸索价值的。
有些产物积累在胞内，达到一定浓度后会抑制，产量不高，如果细胞通透性好，运输到胞外，就会一直合成，结果胞外的说不定远高于胞内的，只分离胞外的就有很大经济价值。有些只能运输到周质空间，也方便分离。
加入青霉素、甘氨酸、生物素之类物质，有的是影响细胞壁，有的是影响细胞膜。

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感谢大家给予的建议
谢谢5楼“有些产物积累在胞内，达到一定浓度后会抑制，产量不高，如果细胞通透性好，运输到胞外，就会一直合成”，我的意图也是这样
我想筛选细胞通透性高的菌种，它是壁或膜有缺陷，能够稳定传代的某种基因型菌种
可行么？

fazchen

还没看见有类似的报告，可能是看得少。

mission

"有些产物积累在胞内，达到一定浓度后会抑制，产量不高，如果细胞通透性好，运输到胞外，就会一直合成"


（1）有什么数据支持你的产物积累在胞内，产量不高？
（2）有些产物积累在胞内，达到一定浓度后会抑制，在细胞外达到一定浓度也后会抑制，
（3）细胞通透性高的菌种， 产物既能出，那么也能进。
（4）大部分情况下，当你得到细胞通透性高的菌种时，细胞内的浓度也同时增加，反之亦然。
（5）改变培养基成分有时能增加产物的分泌，

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发酵液直接离心取上清测效价
处理后发酵液离心后取上清测效价
后者测得效价是前者得4倍左右
所以以此来计算胞外胞内产物的大致含量
可能不是很好的方法
但是应该反映了一些胞内产物的说法
不排除产物一部分是富集在细胞壁外
直接离心发酵液时进入沉淀