有谁做过大肠杆菌的低温诱导表达目的蛋白？

cashpromise · 发表于 2007-9-6 10:01:02

想请教一下，低温的表达量大概比37度诱导高多少？iptg的浓度一般多少？

cashpromise · 发表于 2007-9-6 10:06:29

还有个小问题，我们跑的sds-page电泳有拖尾现象，想问是什么原因？是开始电压过高还是过硫酸铵过期？
我们的目的蛋白旁边有个杂蛋白，很难分开，我们买了个北京六一的大电泳槽，不知道能否分开。再不行，就只能先上柱子了

xff9178 · 发表于 2007-9-6 21:17:44

不同工程菌的表达情况不一样，另外还要看多低的温度，有时候温度低了，连菌体的生长也会受影响

mission · 发表于 2007-9-7 05:46:32

低温的表达量大概比37度诱导高多少？

Case by case

iptg的浓度一般多少？

0.1-1 mM

我们跑的sds-page电泳有拖尾现象，想问是什么原因？是开始电压过高还是过硫酸铵过期？

蛋白量太多，或是没完全溶，离心后再上样。把电左降30%。

wanying · 发表于 2007-9-7 11:25:50

表达量的多少与诱导温度关系不大，采用低温诱导一般是为了改变目的蛋白的表达形式．一般低温诱导可以增大目的蛋白的上清表达量．
ＩＰＴＧ的浓度不同菌有不同的量．一般情况０.８mM与１.０mM 在诱导菌体表达量上基本相同。
如果有杂蛋白与目的蛋白分不开的话建议采用SDS变性PAGE，40%丙烯酰胺。

cashpromise · 发表于 2007-9-7 13:05:22

其实低温诱导是可以增加胞内可溶性蛋白的表达量。谢谢wanying给我的建议！我做个40％的胶看看！

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