粗多糖含量测定中标准品的选择

janice_wuhan

多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖通过糖苷键连接在一起的聚合物(一般10个以上)。多糖是一切有生命的有机体必不可少的成分，它与维持生命的种种生理机能有着密切的联系。用于粗多糖含量测定的方法有很多，一类是利用了多糖的还原性，测定还原性多糖的方法有3, 5-二硝基水杨酸盐(DNS)比色法和Somogyi-Nelson法。另一类测定方法，也是现在普遍使用的方法，是利用多糖在强酸性条件下脱水生成糠醛或其衍生物，然后再与酚类或胺类化合物缩合，生成有特殊颜色的物质的这一性质进行测定，这类方法有地衣酚-硫酸法、苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。
苯酚-硫酸法是用得较多的方法，苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应，己糖在490 nm处有最大吸收值，吸收值与糖含量呈线性关系。此法是先用标准糖制作标准曲线后，再通过多糖的显色反应测定吸光度，然后根据其在曲线上的位置推算出多糖的浓度从而推算其含量。此法操作简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅需制作一条标准曲线。蒽酮-硫酸法是另一种常用的方法，其原理是利用糖类遇浓硫酸脱水后生成糖醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合，反应后溶液呈蓝绿色，于620 nm处有最大吸收，显色深度与多糖的含量呈线性关系。
目前，在制作标准曲线的标准品的选用上普遍存在争议。葡萄糖因为其低廉的价格和方便的来源，一直是研究人员的首选。但当我们深究比色法的原理，发现其本身不能区分单糖和寡糖，所以它的测定结果很大程度上依赖于标准品的选择。此外，比色法通常用浓硫酸短时间水解粗多糖，对于分子量较小的粗多糖，高浓度的硫酸可以在较短时间内将其水解成寡糖和单糖，但当粗多糖的分子量较大时，水解是很难控制的。比如对香菇粗多糖（分子量500,000~1,000,000）的完全水解就需要4M HCl或2M H2SO4于100℃作用3-6小时。因此如果用葡萄糖做标准曲线，势必对粗多糖样品中大分子部分的测量带来很大的误差。所以，国内外的学者的研究数据表明：1）对于比色法测定当标准品与被测样品的结构类似时，得到的结果要准确得多[1]；2）用葡萄糖做标准品和用葡聚糖做标准品测粗多糖含量时，前者测的结果不同程度的偏高[2, 3]。这样看来，用葡萄糖作为测定多糖含量的标准品是不合适的。
认识到这一事实，人们开始逐渐改用葡聚糖作为测定粗多糖含量的标准品，最为广泛使用的是分子量为500,000的葡聚糖(经中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所验证)。百特纯大分子科技有限公司(Putus Macromolecular Sci.& Tech..Ltd)是主要从事碳水化合物大分子领域的新品研发及应用的国际公司，制造并提供高质量、高纯度、高均一性的具有特定分子量和支化度的碳水化合物大分子标准品及其相关产品。我公司采用β-葡聚糖含量最高的燕麦作为原料，提取的燕麦葡聚糖是一种β-(1, 3)和β-(1, 4)糖苷键连接而成的线性多糖，我们使用先进的工艺和技术对粗多糖进行分级，得到分散度极窄(1.01-1.05)的，分子量范围从10, 000到1, 800, 000的单分子量燕麦β-葡聚糖标准品，不含淀粉、蛋白质等杂质，水溶性好，稳定性高。更宽泛的分子量，更窄的分散度，更有竞争力的价格，这无疑缓解了目前国内在粗多糖含量测定中多糖标准品一品难求的局面，为获得更准确的实验结果和更稳定的实验数据提供了有力保证。
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参考文献
[1] M.B.Hall. Challenges with nonfiber carbohydrate methods. Animal Science. 2003, 81:3226- 3232
[2] 胡居吾，范青生，肖小年. 粗多糖测定方法的研究. 江西食品工业. 2005, 1
[3] 李明元. 真菌粗多糖测定方法的研究. 食品研究与开发. 2007, 5

chrqrq

很好，值得试试。

zhanshen

很好啊
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