高效液相色谱法操作注意事项-中药含量测定

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高效液相色谱法操作注意事项

用于中药材、中药制剂的含量测定方法中供试品制备、对照品制备、仪器使用、数据处理等使用注意。

1    实验前准备事项

1.1  对照品的配制
1.1.1    配制方法
取干燥情况下的对照品（注意是否吸潮），每次称取量不得少于5mg，置一定容量量瓶中，加入少量溶剂，超声溶解冷却后再定容、混匀（高浓度）。再用移液管吸取1~2ml至先配制成高浓度的对照品，一定容量量瓶中，加入溶剂定容、混匀，即得（低浓度）。配置后的对照品均需用封口膜封好。
1.1.2   配制浓度
严格按照标准配制对照品浓度（低浓度），不可超过或低于一倍。
1.1.3    所需玻璃仪器和容器
所需玻璃仪器和容器，尽量选用棕色容量瓶进行配制。每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
1.1.4    标签
配制好的对照品标签上应注明：品名、批号、取样量、稀释倍数（浓度）、配制日期。
1.1.5  干燥器
干燥器中的干燥剂每月至少处理一次。
1.2  供试品的制备
1.2.1  取样方法
成品：取10袋装量差异项下的样品，按照相关品种标准含量测定项下有关要求，精密称取两份，进行平行实验。
药材：取样袋中药材全部打粉至规定目数（一般为3～4号筛），按照05年版中国药典相关品种含量测定项下有关要求，精密称取两份，进行平行实验。
1.2.2    称样要求
用万分之一天平称取，使用中注意天平稳定。
1.2.3    量取要求
均用移液管量取或刻度量管。
1.2.4  所需玻璃仪器和容器
所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。

2    实验中注意事项

2.1  实验仪器的准备
2.1.1  仪器安装后是否存在漏液现象？压力是否稳定？柱子是否安反？
2.1.2  检查完毕后，打开电脑、N2000工作站电源开关后，再打开泵电源开关、控制面板上泵开关。先用色谱甲醇冲洗柱子，等待机器平稳后，再打开检测器电源开关、控制面板上检测器开关。30分钟后方可进针做实验。
2.1.3  打开电脑桌面上的N2000在线工作站，选择通道，设定保存路径、波长（注意控制面板上同样需要设置）等实验信息。
2.1.4  设定完毕后，点击数据采集、查看基线、零点校正后，注意观察电脑左下角电压值、时间值波动是否正常？
电压不对：灯是否开启？如果开启还有问题，就重新开启工作站或检测器。
时间不对：调节采样频率（应为10帧/秒）
2.2  流动相的配制
   所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
   先抽滤、后超声（10-15分钟）
2.3  测定法要求
2.3.1  样品进样前先混匀，再用0.45µm滤膜过滤，再混匀后进样。
2.3.2  对照品与样品进样量要尽量保持一致，样品峰面积与对照品峰面积尽量保持一致（不要超过一倍，可适当调整进样量或稀释倍数）。
2.3.3  注意系统评价：理论板数（达到标准要求）、分离度（大于1.5）、拖尾因子（0.95-1.05之间）。
2.3.4  平行进针要求RSD<2％。
2.3.5  进样针每次改进不同样品或对照品时，需用色谱甲醇涮洗五次以上，涮洗位置要超过进样量位置。
2.4  仪器使用过程中注意事项
注意机器异常情况的发生（声音），压力是否过高（超过200Bar不可再做实验），流动相是否流空、废液瓶是否已满等等。
2.5  实验完毕后
   可用甲醇冲洗一小时，如果流动相中含有酸或缓冲盐，则先用新鲜纯水冲洗0.5小时，再用甲醇冲洗一小时。
2.6  人参、西洋参等含量测定
   做波长小于240nm的样品时，注意机器、柱子一定要加长冲洗时间，乙腈则改用进口乙腈。
2.7  保留时间改变的样品
   用于实验时间加长，导致对照品与样品保留时间不一致时，在实验最后加进一针对照品，或采用对照品加样品同时进样的叠加法进样，对照峰面积是否为两者之和。

李小刚7

新乡东源机械有限公司是一家专业生产振动筛的厂商！