双缩脲法测定蛋白质含量

河西走廊

双缩脲法测定蛋白质含量  

一、 教学目的与要求：

① 加强对蛋白质的有关性质的认识；

②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法；

③对学生所学进行综合的测试。

二、 教学实验原理：

蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关，因此利用此进行比色测定蛋白质含量。

在一定条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540—560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度，标准蛋白溶液可以用结晶的牛（或人）血清白蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。

除-CONH-有此反应外，-CONH2-，-CH2-，NH2-，-CS-CS-NH2，等基团亦有此反应。

三、 考核主要内容

1、  标准曲线的制作

取6支干净的试管，按0→5编号，然后按下表依次加入试剂，充分混匀，在室温下放置半小时，以管为空白，在550nm波长处测定消光值（OD），以各管蛋白质含量（毫克）横坐标，OD值为坐标，画出标线。

编号
0
1
2
3
4
5

蛋白质标准液（毫升）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0

蒸馏水（毫升）
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0

双缩脲试剂（毫升）
4.0
4.0
4.0
4.0
4.0
4.0


2、  样品测定：取样品液1.0 ml，同法进行，测其OD值，对照标准曲线求得未知液蛋白质浓度。

3、  分光光度计的使用：规定每组在10min以内全部完成操作（共测6支管）；同时注意操作是否规范。

4、  成绩的计算：此次的实验占30%（包括平时的表现及实验报告的完成情况和完成质量），平时的五次实验共占70%，每次实验按总分为5分为满分进行打分，总评折合成百分制。

四、 实验注意事项：

①     标准样品的浓度为：10μg/ml；

②     实验过程中不得过问他人，同组人可以配合进行；

③     实验报告在课堂上独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他人数据，一旦发现以零分处理；

④     实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做；

⑤     对实验结果进行简单的分析。