枯草芽孢杆菌的涂布

小玮

亲爱的各位弟兄们，不知道你们是否遇到和我同样的问题
就是关于枯草芽孢杆菌的涂布。我是用移液管稀释的9、10、11倍。
然后吹0.1ml至已凝固的蛋白胨培养基，
用自制玻璃涂布棒涂的，涂完之后，培养基面上基本湿润。
37度培养12h后发现，培养基上长的不是单个点的菌落，而是长了一片的菌落。
已经做了四次的重复实验，得到的都是同样的结果。这是由于菌的特性吗？

可是我先吹了稀释的菌液，再倒培养基，基本上长的是一个点一个点状的菌落。。

希望知道的兄弟能告诉小弟解决的方法

zhangkunpeng

1.你的稀释过程是不是有问题。
2.你的蛋白胨培养基有没有先在培养箱中空培养24小时，进行下无菌检测。
3.我们涂布后的平皿不是湿润的，要在火焰口多涂几次。
4.一个平皿对应一个无菌涂布器，不要交叉使用。

wangluxue

从以下几方面找找原因：
1、你涂的这三个稀释度都是长成一片吗？
2、长成一片的菌是你要的枯草芽孢杆菌吗还是杂菌？（如果是杂菌，原因就明了了）
3、自制的涂布棒是倒三角形状吗？
如果以上几方面都是肯定的，那么是不是你的稀释上有问题，可能你的稀释度算错了，或者涂布时出了什么差错，也就这几个原因了。
再问一下，一片是整个板都是一片还是局部的一片？

nihaowoyehao

引用第0楼小玮于2008-05-22 21:15发表的“枯草芽孢杆菌的涂布”:
  亲爱的各位弟兄们，不知道你们是否遇到和我同样的问题
就是关于枯草芽孢杆菌的涂布。我是用移液管稀释的9、10、11倍。
然后吹0.1ml至已凝固的蛋白胨培养基，
用自制玻璃涂布棒涂的，涂完之后，培养基面上基本湿润。
37度培养12h后发现，培养基上长的不是单个点的菌落，而是长了一片的菌落。
.......

第一：平板涂布稀释度不应该是9，10，11倍，如果真是9.10，11倍的话，这三个梯度在平板上是没有什么差别的，长成一片也是正常的。通常应该是稀释三个梯度，比如10的9次方，10的10次方，10的11次方倍。（具体要根据你的菌浓决定，通常使每平板上的菌落数范围在30-300之间）。
第二：对于你说的先吹后倒培养基不明白什么意思。平板上菌落部分生长为一片，通常是由于你的平板水太多。采取相应的措施：a,倒平板时温度不要太高，b，平板最好先倒好，在温箱中倒置放直至平板中没有明显的水，c，涂布后不要着急将平板转移，更不要倒置，先在原地放置30分钟，待涂布的菌液被吸收后再放培养箱中倒置培养。
第三：稀释时使用的移液管不要在涂布时使用，而应更换一新的移液管，而且从低浓度到高浓度吸取。
第四：长成一片，跟菌没有关系。

wyhwym

长成一片有一种最重要的原因就是平板要过夜，万一不行涂布时候的时候要涂布干了，和其他没有什么关系！

hsulbjay

nihaowoyehao:第一：平板涂布稀释度不应该是9，10，11倍，如果真是9.10，11倍的话，这三个梯度在平板上是没有什么差别的，长成一片也是正常的。通常应该是稀释三个梯度，比如10的9次方，10的10次方，10的11 .. (2008-06-24 13:47) 

完全正確的觀念