大家讨论一下基因工程菌平时培养与保存注意事项！

youngkee

基因工程菌，现在已经是发酵工厂大部分应用的发酵菌种，它与其他菌种有比较多的不同，如平时培养不当，关键基因可能脱落，导致生产水平下降……
大家有这方面的研究或经验，希望能在这里和大伙一起交流交流！

perrence

工业的我就不清楚了，不过实验室里我们在表达出现问题时一般都会检测是否是目的基因脱落的原因，主要方法就是提取质粒，酶切和PCR等技术，感觉工程菌用于发酵时只要条件不变，很少出现问题的

yulei0229

关于关键基因脱落，一般有两种情况。

一是质粒丢失造成，质粒携带有提高目的产物的关键基因，主要采用抗性维持质粒稳定，在摇瓶阶段依然加入抗生素。
前一段有个新想法，可以不用抗生素依然维持质粒的稳定性，理论可行，尚未验证，过一段再与大家交流。

二是染色体片段丢失，这样的可能性不大。高温生产菌有这方面的报道。
主要是不断升高温度传代选育的生产菌，造成某些基因的多拷贝，
当温度恢复到自然温度时，拷贝数会自然降低至野生型，
因此，保证培养方式是很重要的。

vei_20004

对于基因工程菌的保存，国外看到有的报道介绍已经有不使用抗生素来稳定质粒。
菌种保存对于保存温度、湿度要有一定要求。

yulei0229

引用第3楼vei_20004于2008-08-18 09:09发表的  :
对于基因工程菌的保存，国外看到有的报道介绍已经有不使用抗生素来稳定质粒。
菌种保存对于保存温度、湿度要有一定要求。

呵呵，请问哪里有不用抗生物稳定质粒的研究报道？

我这些天一直没查到。

有用rep、mob系列基因维持稳定性的菌株，但没有完全脱离抗性

毕竟失去质粒的菌与含有质粒的菌相比具有生长优势

砂器

我们有一个基因工程菌种不用抗生素，仅用甘油管超低温保藏，每次用时取一支出来转接，三年多来一直用于工业发酵大生产，其生产能力很稳定。

wt__001

菌种保存对于保存温度、湿度要有一定要求。