请教一些酶酶活的检测方法

blueicedu · 发表于 2008-8-18 15:09:04

引用第9楼haylig于2008-05-09 12:46发表的 :
请问磷酸果糖激酶测定的反应体系中各物质的添加体积是多少，就是它们以什么比例混合然后达到终体积？

Tris-HCl (pH 7.6) 50mM
MgCl2•6H2O 5mM
Mercaptoethanol 5mM
.......

表格中的浓度（如：MgCl2•6H2O 5mM ）是反应体系中最终的浓度，所以只要确定了反应最终的体积，以及你最初配制的MgCl2•6H2O等的浓度，就可以确定加入的比例了。

czthisme · 发表于 2009-1-24 19:45:42

谢谢版主帮助

bioferment · 发表于 2009-10-21 19:23:07

Fructose-1,6-biphosphate aldolase
这个酶根本买不到啊，谁告诉我哪儿买，多少钱啊？

谢谢！

blueicedu · 发表于 2009-11-4 13:10:45

引用第13楼bioferment于2009-10-21 19:23发表的 :
Fructose-1,6-biphosphate aldolase
这个酶根本买不到啊，谁告诉我哪儿买，多少钱啊？

谢谢！

大多数试剂都是在sigma买的，有个别实在另一个挺大的生物制品的外国公司买的，名字不记得了，当时实验室有一本很厚的产品目录，Fructose-1,6-biphosphate aldolase 可能就从那里找的。酶都是很贵的，以美金计算的，而且量都很少的。

mche2005 · 发表于 2010-6-27 11:24:59

酶活测定底物供应商：sigma、megazyme、fluka等。祝好运。

estander · 发表于 2010-7-15 22:03:31

引用第6楼blueicedu于2008-03-27 20:40发表的 :
做过磷酸果糖激酶的测定，具体方法简述如下：
1 无细胞粗提液的制备
取一定量发酵液冷冻离心（4℃，8000rpm，10min），用生理盐水清洗2次后，放置在－20℃冰箱备用。
将处理好的菌体悬浮于PED缓冲液（75mM KH2PO4, 2mM DTT，1mM EDTA，pH 7.0）中，冰浴中用超声波破碎（工作功率：400W；工作时间：3S；间歇时间：6S；工作次数：50次），冷冻离心（4℃，10000rpm,30min），上清液即为无细胞粗提液。
将酶无细胞粗提液稀释到一定浓度立即进行酶活检测，蛋白质含量用考马斯亮蓝染色法测定，以牛血清蛋白作为参照标准。
.......

我怀疑你做过吗？
当然也可能做过哦
不过反应机理中你说错了：不是按照EMP途径向下走的不是脱氢形成甘油酸而是加氢形成3-磷酸甘油催化反应的酶是3-磷酸甘油脱氢酶走的是甘油形成的支路
如果我没猜错的话你参考的可能是某个人的学位论文的测酶文献吧他也是这么写错的的
这样的问题可以到代谢工程与调控板块问

estander · 发表于 2010-7-15 22:05:54

引用第13楼bioferment于2009-10-21 19:23发表的 :
Fructose-1,6-biphosphate aldolase
这个酶根本买不到啊，谁告诉我哪儿买，多少钱啊？

谢谢！

sigma有上海生工没有

estander · 发表于 2010-7-15 22:08:22

引用第13楼bioferment于2009-10-21 19:23发表的 :
Fructose-1,6-biphosphate aldolase
这个酶根本买不到啊，谁告诉我哪儿买，多少钱啊？

谢谢！

这两天还在sigma订购这套酶 ALD TPI GPDH 按一般量订购打给也要2000多元钱吧

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