关于基因工程菌的质粒丢失

nslele · 发表于 2008-4-6 10:48:33

我们这里刚引进基因工程菌，但是却遇到了基因工程菌质粒丢失的问题
用的大肠杆菌的基因工程菌
我想请教一下，质粒丢失的几率有多大？丢失后的性状表现是什么？

路人甲 · 发表于 2008-4-12 16:08:28

我认为成熟的基因工程菌是不会出现质粒丢失的。
基因工程菌的质粒通常会有一定的筛选基因，比如抗生素抗性基因（氨苄、卡纳），你可以把菌涂到相应的抗性平板，如果能长出菌落就是没丢失，如果死掉了就表明丢失了；最简单的办法就是挑单菌落培养提取质粒，跑个电泳看看。

vei_20004 · 发表于 2008-7-24 22:40:43

质粒丢失，那发酵就没有单位，只生长菌丝。

misser217 · 发表于 2008-8-1 15:25:39

呵呵,某些表现质粒不稳定,发酵效价低
关键不是看质粒是不是丢失,而是稳定
我们要100%质粒稳定的菌种来生产
具体如2楼说的,有些抗性基因可以很好的来筛选质粒稳定的菌种

yulei0229 · 发表于 2008-8-1 16:05:33

一般质粒带有抗性，传代过程中不会丢失。

但在发酵过程中，不加抗生素，可能造成质粒丢失，减少目的产物量（发生的比例不高）。

工程菌的抗性可以携带与菌体复制相关的基因（具体哪三个基因忘了，以后补上，如载体为pAYC32），

可以降低质粒丢失比例至。

孑孓 · 发表于 2008-8-19 15:21:16

俺觉着吧，关于确认质粒是否丢失，抗性筛选不如单菌落培养然后提质粒来得准确。

hemin_168 · 发表于 2008-8-30 23:27:19

质粒丢失试验我们基本上每罐都在跟踪做,丢失量在4%左右,对产酸几乎不影响.

larwarn · 发表于 2008-9-4 21:48:34

质粒丢失是必然的
要看丢失的比例

kuaikuai · 发表于 2008-9-17 17:15:32

丢失是必然的！丢失比例要看构建的菌种是否稳定

春华秋实 · 发表于 2009-1-31 12:56:50

引用第6楼hemin_168于2008-08-30 23:27发表的 :
质粒丢失试验我们基本上每罐都在跟踪做,丢失量在4%左右,对产酸几乎不影响.

请教你们如何做质粒丢失实验？如何确定丢失量的？

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