关于基因工程菌的质粒丢失

w.zam

药典三部附录中有检测质厘丢失率方法，很简单的，一般大规模生产中经验判断丢失率应少于30%，再多就不合适了。你也可将发酵液涂布抗性和非抗性平板各3块，用t检验判断是否有显著差异

whbio

一般来说质料丢失后就长得快了吧

tanche163

质粒丢失是必然的，对于菌来说质粒是一个负担，所以必须有外界选择性的压力，如抗生素，但是如果用整合型的质粒就没有问题，比如说在酵母中插入一个基因，但大肠杆菌貌似只有游离质粒

onroad

最根源的是构建的载体系统是否稳定。
质粒的丢失是不可避免的，即使有抗性压力，但传代次数达到一定代数后，还是会发生丢失（例如应用最广泛的商业质粒PET载体），因此最根源的是构建时一定要稳定。

另外：看大家的回复中，很热衷于氨苄青霉素、卡那霉素等抗生素做为选择压力。但是，在医药生产GMP要求中，是不允许用这些抗生素的。在食品中可能要求低一些，但氨苄做为青霉素药物类，存在很大安全隐患，最好是不用

meander18

超低温保存时甘油量高了容易丢失质粒。你可以直接保存质粒，用时转化一下即可。

jilsfh

1：质粒丢失是微生物成长必然，，不用太急，很正常。
2：比较质粒稳定性方法：a，普通培养基；   b，加抗生素培养基，，，2个摇瓶或者小罐培养后计数（稀释10的4，5，6，7，8次方算平均），这样可以看看数量相差越大，，稳定性越差，对抗生素的依赖越大。相差越小，说明越稳定，不容易丢失

jiangdeqi198

引用第14楼meander18于2009-07-31 17:27发表的  :
超低温保存时甘油量高了容易丢失质粒。你可以直接保存质粒，用时转化一下即可。

甘油浓度最好在低于10%,最好为7%.

地平线

我做过好多次质粒丢失检测，从未发现丢失现象

ljyan0519

引用第13楼onroad于2009-06-10 13:46发表的  :
最根源的是构建的载体系统是否稳定。
质粒的丢失是不可避免的，即使有抗性压力，但传代次数达到一定代数后，还是会发生丢失（例如应用最广泛的商业质粒PET载体），因此最根源的是构建时一定要稳定。

另外：看大家的回复中，很热衷于氨苄青霉素、卡那霉素等抗生素做为选择压力。但是，在医药生产GMP要求中，是不允许用这些抗生素的。在食品中可能要求低一些，但氨苄做为青霉素药物类，存在很大安全隐患，最好是不用

13楼说的是对的，实际上发酵罐的发酵，是不加抗生素的。对于已经有的菌种，重新构建不可能，能做到避免质粒丢失的就是让菌体长的慢点，这是最有效实用的方法。

dqliao

加抗生素一方面可防止质粒丢失，另外也对减少杂菌的污染有一定的作用。但食品及药品等行业对抗生素的使用开始有一定的限制。个人认为将外源基因整合到宿主基因组染色体是一个办法。