求救！菌种复壮的问题

landwind

我现在用的菌种是经过诱变的，传代传到了第八代就出现了退化了。我是用斜面加冷藏的方法保藏菌种的。各位大侠能不能给点菌种复壮的建议啊？从哪一代开始做复壮比较好啊？

008chf

每一代都保存。
制作细胞库，原始细胞库、主细胞库、工作细胞库，主细胞库由原始细胞库直接传代（或由工作细胞评价后上升），工作细胞库由主细胞库传代，平时使用工作细胞库，可保证菌种稳定。

五牛

一方面保藏方法需要优化，你的这种保藏方法就不是酵稳定地，可以尝试甘油等深冷保藏。另一方面可以通过一楼楼主地方法建立细胞库。

landwind

谢谢啊

zouql2005

沙土管保藏也可以试试

vb_5

1、菌种最有效的保存办法：采用冻干保存
2、根据你提供的菌种退化速度，第六代应该复壮
3、复壮的常用办法：稀释活化复壮
   活化方法：配制一定体积的0.25％（m/v）的磷酸二氢钾、0.75％（m/v）的磷酸氢二钾缓冲液，在5支50ml试管中（内预放3～5颗玻璃珠）各量入10、9、9、9、9ml（蒸汽灭菌），然后挑取斜面菌种中的菌落放入10ml试管，振荡后吸取1mL转移到9ml试管，依次稀释4个梯度，最后各吸取0.2ml进行平板涂布，在28℃的培养箱中培养48——72小时，挑取较好的单菌落转接到试管或茄子瓶斜面培养基培养72~96小时，冷藏保藏(以上操作均需在无菌状态下进行)。

chenhelong

单孢子分离

minger

复壮。。简单说就是分单菌落。。然后分别测活。。最后保藏

甘油管保藏最简单

luckystar18

每代均择优进行沙土管保藏，简单，效果好！

czthisme

谢谢